Комплекс это: Недопустимое название — Викисловарь

Автор: alexxlab · Опубликовано 12.02.1980 · Обновлено 26.10.2021

Содержание

КОМПЛЕКС — это… Что такое КОМПЛЕКС?

Комплекс — По ГОСТ 2.101 68* Источник … Словарь-справочник терминов нормативно-технической документации

комплекс — а, м. complexe m., adj. &GT; англ. complex &LT;лат. complexus. 1. Совокупность однородных элементов, составляющих определенное целое. Павленков 1911. Совокупность, сочетание предметов, явлений, свойств. Комплекс гимнастических упражнений. БАС 1.… … Исторический словарь галлицизмов русского языка

комплекс — (от лат. complexus связь, сочетание) соединение отдельных психических процессов в целое, отличное от суммы своих элементов (см. системности принцип в психологии). В этом смысле понятие «К.» употребляли многие психологи (см … Большая психологическая энциклопедия

КОМПЛЕКС — Совокупность однородных предметов, образующих целое. Словарь иностранных слов, вошедших в состав русского языка. Чудинов А.

Н., 1910. КОМПЛЕКС однородная совокупность, рассматриваемая как одно целое. Полный словарь иностранных слов, вошедших в… … Словарь иностранных слов русского языка

КОМПЛЕКС — КОМПЛЕКС, комплекса, муж. (лат. complexus, букв. сплетение). 1. Совокупность, сочетание явлений или свойств. Сложный комплекс общественных взаимоотношений. Комплекс болезненных проявлений. Комплекс представлений. 2. (удар. только комплекс). Метод … Толковый словарь Ушакова

комплекс — отличается от понятия отношением, которое устанавливается между индивидуальным предметом и групповым именем &LT;…&GT; в комплексе индивид сохраняется как таковой, а сам комплекс объединяет различные элементы не на основании внутренней… … Словарь Л.С. Выготского

Комплекс — Комплекс ♦ Complexe Многосоставная совокупность элементов, затрудняющая целостное восприятие предмета. Термин «комплекс» широко используется в психологии и психоанализе для обозначения группы сознательных или бессознательных представлений… … Философский словарь Спонвиля

КОМПЛЕКС — (от лат. complexus связь, сочетание) 1) совокупность, сочетание объектов, предметов, действий, тесно связанных и взаимодействующих между собой, образующих единую целостность; 2) группа взаимосвязанных отраслей, подотраслей, предприятий,… … Экономический словарь

комплекс — совокупность, сочетание, объединение, ансамбль; сомнение, причуда, страсть, странность, слабое место, ахиллесова пята Словарь русских синонимов. комплекс см. сомнение Словарь синонимов русского языка. Практический справочник. М.: Русский язык … Словарь синонимов

КОМПЛЕКС — КОМПЛЕКС, а, муж. 1. Совокупность, сочетание чего н. К. машин. К. представлений. 2. Совокупность связанных друг с другом отраслей народного хозяйства или предприятий различных отраслей хозяйства. Агро промышленный к. Территориально… … Толковый словарь Ожегова

Что такое жилые комплексы и как это должно выглядеть на самом деле? — блоги риэлторов

Всем доброго дня и удачного начала рабочей недели!

Сегодня, я хотел бы поговорить о жилых комплексах и изучить разницу между тем, что продают в России и СНГ и тем, что должно быть на самом деле.

Итак, что же такое жилой комплекс (ЖК)?
Жилой комплекс — это территория на которой располагаются жилые дома, инфраструктурные объекты, парковки и т.д. Обычно, это закрытые территории и право входа на территорию есть только у жителей и их гостей.

К сожалению, в странах СНГ вместо того, чтобы строить действительно жилой комплекс, строят просто несколько одинаковых зданий и называют это место — жилой комплекс. Только в редких исключениях, на территории комплекса строят инфраструктурные объекты, такие как магазины, рестораны, и т.д.

Теперь, давайте посмотрим, что подразумевается под понятием ЖК на Северном Кипре.
Когда на Северном Кипре строят комплекс квартир, то в первую очередь проектируется и строится инфраструктура будущего комплекса. В обычный городской комплекс входят: Огороженная территория, ландшафтный дизайн, бассейн, тренажерный зал и, иногда, магазин. Типичный городской комплекс выглядит следующим образом:

В данном конкретном случае, в комплексе есть бассейн по всей территории, ресторан, огороженная и охраняемая территория, тренажерный зал и ландшафтный дизайн.

Коренным образом, от городских комплексов, отличаеются комплексы, расположенные в туристических районах. Там вы найдете абсолютно все! Как пример приведу еще один комплекс из туристического места на Long Beach, Famagusta.

В этом прекрасном комплексе, помимо близости Средиземного моря, вы найдете:

* SPA салон
* Ресторан
* Тренажерный зал
* Комната для активного отдыха (настольный теннис, футбол, бильярд и игровые приставки)
* Прокат велосипедов
* Мини-маркет
* Прокат автомобилей

* Парковка
* Сауна
* Турецкий хамам
* Джакузи
* Мини-гольф
* BBQ площадка
* 3 бассейна (1 с горками и подогревом)
* Охраняемая и озелененная территория

Такие комплексы повсеместно разбросаны по береговой линии на Северном Кипре. Большая часть услуг абсолютно бесплатно для жителей комплекса (кроме магазина, ресторана и проката авто). При этом цены, например в ресторане, совсем демократичные. Стейк на 320 гр. чистой говядины стоит всего 11 долларов, при этом, вам в придачу принесут полный стол закусок и мезе.

Для того, чтобы комплекс мог нормально функционировать, создается управляющая компания, которая ответственна за уборку территорий, чистку бассейнов, а также устранение неполадок в апартаментах (сантехника, электрика и т.д.). Обычно эта компания расположена прямо на территории комплекса, что сокращает время ожидания работников, в случае проблем.

Ну и напоследок, о новом комплексе, который строит компания из ОАЭ, которая строила знаменитый небоскреб «Парус». Этот комплекс произвел фурор на рынке Северного Кипра и, несмотря на то, что работы по строительству начались всего 2 месяца назад, уже более 70 % комплекса распроданы!

Всего хорошего вам и удачи в делах!
Не забывайте делиться мнением и записью в ваших социальных сетях!
Вам не сложно, а мне приятно!

«Первый комплекс – это наш первый шаг» — Единый Портал органов государственной власти и местного самоуправления «Официальный Татарстан»

23. 06.2020

Сегодня Государственный Советник Республики Татарстан, Председатель Попечительского Совета Республиканского Фонда «Возрождение» Минтимер Шаймиев провел выездное совещание по вопросам строительства объектов первого полилингвального общеобразовательного комплекса «Адымнар – путь к знаниям и согласию» в г. Казани.

Минтимер Шаймиев и участники совещания ознакомились с ходом работ на улице Бичурина Ново-Савинского района, на территории средней общеобразовательной школы №165, где завершается реконструкция старого здания и возведение новой средней школы на 800 учащихся 5-11 классов. Данная школа включает в себя: столовую с обеденным залом на 400 мест, бассейн, спортивный зал, гардеробы, мастерские на 1 этаже, актовый зал на 500 мест, учебные кабинеты, библиотеку на 2 этаже и учебные кабинеты на 3и 4 этажах. Общая площадь здания около 14 тыс. кв м.

На сегодняшний день на всех этажах завершено бетонирование стен и колонн, парапетов, устройство перекрытий, кровли, наружной теплотрассы, кирпичная кладка стен, монтаж окон и витражей, началась чистовая отделка.

Реконструкция старого здания ведется параллельно, после ремонта там разместится начальная школа на 400 мест.

Затем в одном из будущих учебных кабинетов состоялось совещание по обсуждению вопросов, требующих оперативного решения.

Минтимер Шаймиев отметил, что к 1 сентября текущего года планируется сдать в эксплуатацию, по сути, три здания – три школы: реконструированная начальная, новая билингвальная по улице Бичурина и новая полилингвальная по улице Бондаренко, все вместе, включая детские сады и загородный центр дополнительного образования, они составляют первый полилингвальный образовательный комплекс «Адымнар – путь к знаниям и согласию» в республике.

«Первый комплекс – наш первый шаг к новой форме образования, поэтому от нашей сегодняшней работы зависит многое, это в дальнейшем будет определять подходы к развитию образования. Изменения в системе образования неизбежны, их диктует время, открытость мира и мы должны предоставить нашим детям возможность быть конкурентоспособными.

Вот такой исторический момент оказался в наших с вами руках», — подчеркнул он. — Объем работы на комплексе огромный, но мы должны ее выполнить в срок даже в условиях пандемии. Нужно сделать добротно, чтобы все могли гордиться, потому что это для наших детей».

Он поблагодарил мэра г. Казани Ильсура Метшина за всестороннюю поддержку и эффективную работу администрации города в решении возникающих вопросов по строительству.

Мэр города Казани Ильсур Метшин в свою очередь поблагодарил всех участников проекта и подчеркнул, что кроме строительства прекрасной школы, очень много нужного и важного делается для жителей столицы, ее окрестностей по благоустройству, улучшению условий проезда и т.д.

Директор МАОУ «Средняя общеобразовательная школа №165» Айдар Шамсутдинов представил новый проект, инициированный мэром Казани Ильсуром Метшиным, «Растем вместе — Бергә үсәбез», который предусматривает создание на территории новой школы по ул. Бондаренко лаборатории микроклонирования: выращивания саженцев деревьев в короткие сроки. Проект разработан Управлением образования Казани в целях массового вовлечения детей в деятельность по сохранению и восстановлению городских лесов, посадки деревьев в придворовых и школьных территориях.

«Каждый ученик нашей школы сам будет выращивать саженцы, чтобы потом сажать их в городе, по территории республики. Проект созвучен всемирной акции «Миллиард деревьев», реализующейся под эгидой ООН с 2006 года», — сообщил Айдар Шамсутдинов.

В совещании приняли участие заместитель Председателя Государственного Совета РТ, исполнительный директор Республиканского Фонда «Возрождение» Татьяна Ларионова, Заместитель Премьер-министра РТ, министр образования и науки РТ Рафис Бурганов, министр строительства, архитектуры и ЖКХ РТ Фарит Ханифов, Заместитель Руководителя Аппарата Президента РТ – руководитель Секретариата Государственного Советника РТ Олег Глебов, глава администрации Авиастроительного и Ново-Савиновского районов г.Казань Тимур Алибаев, руководители проектных и строительных организаций.

Пресс-служба Президента РТ

COMPLEX — Перевод на русский

So, bladders are definitely a little bit more complex than the other structures.

Так что, мочевой пузырь, определенно, немного сложнее чем другие структуры.

So, I hope to convince you that complex doesn’t always equal complicated.

Я надеюсь убедить вас в том, что сложность не всегда означает запутанность.

And in a chemically more complex universe, it’s possible to make more things.

И в химически более сложной Вселенной, возможно сделать больше вещей.

And the universe is now significantly more interesting and more complex.

И Вселенная в это время уже значительно более интереснa и более сложна.

Now I can describe the symptoms of the God complex very, very easily.

Теперь я могу описать вам симптомы комплекса бога очень, очень просто.

But anyone who’s ever had, or knows, small children knows they’re incredibly complex organisms.

Но все, кто имел дело с маленькими детьми, знают, что они — невероятно сложные организмы.

What’s true for color is also true for complex perceptions of motion.

Что верно для цвета, верно и для комплексного восприятия движения.

And that has feature sizes down to about 20 nanometers, and it’s a complex 3D structure.

И для него размер элемента составляет всего около 20 нанометров, и это сложная трёхмерная структура.

We have a brain for one reason and one reason only, and that’s to produce adaptable and complex movements.

У нас мозг только по одной простой причине: чтобы делать сложные движения.

And thirdly, the idea that machines are becoming biological and complex is at this point a cliche.

И в третьих, идея о том, что машины становятся биологическими и сложными на этом этапе — клише.

And if you want to understand how it’s more complex let me start with something kind of interesting.

И если вы хотите понять, насколько это сложнее, позвольте мне начать с одной интересной вещи.

Insolvency of large and complex financial institutions

Несостоятельность крупных финансовых институтов со сложной структурой

And I’d like you to think that every bit of more complex play builds on this base for us humans.

Я хочу, чтобы вы думали, что каждый кусочек более сложной игры у нас, людей, строится на этой основе.

And how are we going to understand all this complex information?

И как мы собираемся понимать всю совокупность информации?

Here are some examples of how to handle more complex situations:

Ниже представлены примеры решения более сложных задач.

Another one is sometimes people say, well, brains are so complex, it’ll take another 50 years.

В качестве другой причины иногда приводят то, что мозг столь сложен, что построение теории займёт ещё 50 лет.

Living creatures are too complex to have come about by chance; therefore, they must have had a designer.

Живые существа слишком сложны, чтобы возникнуть просто случайно, поэтому они должны иметь создателя.

And the thing that’s happened is, they canceled the TV-industrial complex.

И вот что случилось: они отменили ТПК.

You want to not only synthesize the very large and the very small, but we want to understand the very complex.

Мы хотим не только синтезировать очень большое с очень малым, но и понять всю совокупность в целом.

Axis offers a simplified model of a complex reality.

Axis предлагает упрощенную модель сложной действительности.

это .

.. значение слова КОМПЛЕКС

КОМПЛЕКС

КОМПЛЕКС, -а, м. 1. Совокупность, сочетание чего-нибудь Комплекс машин. Комплекс представлений. 2. Совокупность связанных друг с другом отраслей народного хозяйства или предприятий различных отраслей хозяйства. Агро-промышлвнный комплекс Территориально-производственный комплекс Военно-промышленный комплекс Топливно-энергетическии комплекс 3. Группа зданий, сооружений единого назначения. Архитектурный, животноводческий, спортивный, туристский комплекс Комплекс неполноценности — болезненное осознание своих недостатков, неполноценности в каком-нибудь отношении. С комплексом кто (разговорное) — о том, кто болезненно недоволен чем-нибудь в себе самом. Без комплексов кто (разговорное) о том, кто нормален, уверен в себе. || прилагательное комплексный, -ая, -ое (к 1 значение). Комплексная автоматизация производства. Комплексное (комплексное) число (спец.

) — сумма действительного и мнимого чисел.

КОМПЛЕКС

) — сумма действительного и мнимого чисел.

Зачем нужны мультивитамины? — Наука о красоте — Красота и здоровье — Beauty Edit

Что это вообще такое?

Мультивитамины — это комплексы в форме таблеток, содержащие различные витамины и минералы, которые не вырабатываются организмом человека и должны поступать вместе с пищей. Прием мультивитаминов не заменяет необходимость следить за питанием, но может быть ценным дополнением к любой здоровой диете.

Улучшат ли мультивитамины мое здоровье?

Здоровое питание должно обеспечивать основные потребности организма в полезных веществах, и витамины могут служить лишь в качестве добавки. Комплекс «Мультивитамины и минералы» Wellness для мужчин и для женщин состоит из 12 витаминов и 10 минералов, тщательно отобранных для заботы о твоем здоровье. В том числе в нем содержатся витамин В для обеспечения тебя энергией и витамин D для здорового иммунитета.

Безопасно ли принимать мультивитамины каждый день?

Определенно, да. Но только в том случае, если мультивитаминный комплекс содержит в достаточном и необходимом количестве нужные витамины и мультиминералы — не больше и не меньше, чем тебе нужно для поддержания здоровья. Необходимо придерживаться инструкции и соблюдать дозировку. Если ты не уверена в том, насколько тебе подходит такой вариант, посоветуйся со своим лечащим врачом.

Улучшат ли мультивитамины состояние моей кожи?

Ингредиенты, улучшающие состояние кожи, как правило, входят в состав мультивитаминов. Например, витамин С — этот мощный антиоксидант играет важнейшую роль в процессе выработки коллагена, необходимого твоей коже для сохранения жизненной силы и гладкости.

Помогут ли мультивитамины справиться с усталостью?

Причин усталости может быть множество: стресс, плохое настроение, пищевая аллергия, болезнь и, конечно, нехватка сна. Хотя мультивитаминный комплекс и не может служить лекарством от усталости, помочь он в состоянии. Содержащееся в комплексе железо помогает кислороду циркулировать в организме, а магний отвечает за уровень энергии. Также мультивитаминные комплексы поддерживают иммунитет, предотвращая многие заболевания, которые могут стать причиной усталости.

Нужны ли мне мультивитамины, если я много тренируюсь?

Мультивитамины призваны заполнить пробелы в твоей диете — ни одна тренировка в мире на такое не способна. Также мультивитаминные комплексы содержат кальций, магний и витамин D, необходимые для правильного восстановления организма после нагрузок. Наконец, мультивитамины улучшают состояние легких и сердца, а это для занятий спортом совершенно необходимо.

Что такое комплекс маркетинга: модели — Определение

Комплекс маркетинга — это концепция продвижения компании и товаров на рынке с помощью разных маркетинговых моделей. Классическая версия такой модели называется 4Р и состоит из следующих направлений: продукт (Product), цена (Price), место (Place), продвижение (Promotion).

В этом видео основатель In-scale Никита Жестков рассказал о том, что такое маркетинг 4P и 5P.

Цель комплекса маркетинга

Комплекс маркетинга помогает повысить эффективность работы компании и удовлетворить потребности целевой аудитории. Для результативного продвижения на рынке важно разработать стратегию и создать подробный маркетинговый план решения поставленных задач. Давайте посмотрим, каких целей можно достичь с помощью комплекса маркетинга.

Повышение продаж. С помощью инструментов комплекса маркетинга бренды выстраивают новые каналы сбыта, разрабатывают программы лояльности, повышают узнаваемость. Рост продаж увеличивает прибыль компании и укрепляет ее позиции на рынке.
Увеличение уровня удовлетворенности покупателей. С помощью комплекса маркетинга компании удовлетворяют потребности и желания целевой аудитории. Это увеличивает лояльность клиентов, а также повышает уровень удержания и LTV.
Построение положительного имиджа компании. С помощью ATL и BTL-рекламы, социальных доказательств, событийного маркетинга и других инструментов компании увеличивают узнаваемость бренда, завоевывают расположение целевой аудитории и укрепляют репутацию.
Оптимизация бизнес-процессов. Качественное управление процессами помогает отслеживать результативность, контролировать скорость и качество работы, улучшать маркетинговую стратегию.

Независимо от того, каких результатов компания желает достичь и какую выбирает модель комплекса маркетинга, успех во многом зависит от четкой постановки целей. Поэтому, лучше всего использовать систему SMART. Тогда цели будут конкретными (Specific), измеримыми (Measurable), достижимыми (Attainable), релевантными (Relevant). Далее вы подробнее узнаете о классической модели комплекса маркетинга.

Элементы комплекса маркетинга 4P

Модель комплекса маркетинга была описана в статье Нэла Бордена в 1964 году. Он собрал воедино все маркетинговые инструменты, необходимые для продвижения товара компании. Позже Джером Маккарти взял маркетинг микс Бордена и преобразовал его в модель 4Р. Большой вклад в ее популяризацию сделал известный во всем мире маркетолог Филип Котлер. Посмотрите, из каких элементов состоит модель 4Р.

Product (продукт). Это то, с чего начинается комплекс маркетинга. Чтобы заинтересовать целевую аудиторию и удовлетворить ее потребности, компания продумывает свойства продукции, ассортимент, создает фирменный стиль и многое другое.
Price (цена). Стоимость продукта или услуги определяют на основании средней рыночной цены, спроса, себестоимости товара и желаемой прибыли. Компания исследует ценообразование конкурентов, устанавливает розничную цену, а также продумывает систему скидок.
Place (место продажи). В этом направлении определяют каналы сбыта, вид дистрибьюции, способы размещения товара в точках продаж, продумывают логистику и решают другие задачи, которые влияют на доступность продукции целевой аудитории.
Promotion (продвижение). Чтобы повысить узнаваемость бренда и рассказать потенциальным покупателям о продукте, компании используют множество разных инструментов. Они разрабатывают медиапланирование, подключают событийный и прямой маркетинг, продумывают способы стимулирования продаж и многое другое. Также на этом этапе устанавливают маркетинговый бюджет.

В зависимости от ниши и специфики работы компании, бренды дополняют модель 4Р под свои нужды. Поэтому можно встретить и другие варианты этого комплекса маркетинга, с которыми вы ознакомитесь в следующем разделе.

Модели комплекса маркетинга

Высокая конкуренция и постоянные изменения на рынке привели к расширению модели 4Р и поиску новых направлений маркетингового планирования. Ознакомьтесь с некоторыми из них.

5P

Этот комплекс маркетинга включает модель 4Р плюс дополнительный элемент «People» — маркетинг отношений. Это направление предполагает разработку механизмов взаимодействия между субъектами рыночных отношений, подбор и обучение персонала, создание методов работы с лидерами мнений, запуск программ лояльности и многое другое. Модель 5Р идеально подходит для компаний в сфере обслуживания: гостиниц, ресторанов, салонов красоты и так далее.

7P

Модель 7Р — это еще более усовершенствованная версия 4P. Её дополняют следующие элементы: People, Process (процесс оказания услуг) и Physical evidence (физические окружение). Давайте подробнее рассмотрим последние два.

Process. Подразумевает развитие и оттачивание процессов взаимодействия с клиентами. Это направление помогает повысить лояльность потребителей и увеличить конкурентоспособность компании. Так слаженная работа сотрудников McDonald’s помогла добиться высокой скорости обслуживания, за которую многие и любят эту сеть.
Physical evidence. Это направление подразумевает создание благоприятной атмосферы вокруг потребителя, поскольку она влияет на его решение о покупке и лояльность. Правильное физическое окружение помогает сформировать положительный имидж бренда и выделить главные преимущества продукта.

SIVA

Модель SIVA — это альтернатива 4Р, которая была предложена в 2005 году. Фокус этого комплекса маркетинга перенаправлен с продукта на решение проблемы потребителя. Давайте детальнее разберем каждый из элементов модели SIVA.

Solution (Решение). Это направление нацелено на поиск максимально подходящего решения, чтобы удовлетворить потребности покупателей.
Information (Информация). Компании узнают, знакома ли целевая аудитория с продуктом, достаточно ли у них информации, чего им не хватает для принятия решения о покупке, какие каналы использовать для коммуникации и так далее.
Value (Ценность). В этом направлении компании определяют ценность продукции для клиентов. Они анализируют конкурентную среду, исследуют аналоги, представленные на рынке, рассчитывают добавленную стоимость.
Access (Доступ). Это направление предполагает создание удобных для потребителей точек продаж. Компании стремятся предоставить клиентам доступ к продуктам и услугам в удобном месте и в подходящее для них время.

Существует и ряд других моделей комплекса маркетинга. Например 4С, 4А, 5P+1S и другие. Выбор модели маркетинговой стратегии зависит от сферы деятельности компании, уровня конкуренции, целей и других факторов. Главное при выборе комплекса маркетинга — полагаться на удобство работы. Модель должна систематизировать и упрощать бизнес-процессы.

Ресурсы:

На этом сайте вы прочитаете историю 4Р, а также ознакомитесь с расширенными моделями комплекса маркетинга.
В этой статье вы ознакомитесь с основными моделями комплекса маркетинга.
Здесь познакомитесь с примерами комплекса маркетинга.
На сайте Записки маркетолога прочитаете о концепции комплекса маркетинга.
А в этой статье узнаете, как разработать комплекс маркетинга для своей компании.

Обновлено: 14.07.2021

Оцените, насколько полезна статья «Комплекс маркетинга»

Оценка: 5 / 5 (8)

Промышленный комплекс «Спаситель белых» — Атлантика

Если мы собираемся вмешиваться в жизнь других, небольшая должная осмотрительность является минимальным требованием.

Слева, Невидимый Детский Джейсон Рассел. Правильно, лидер протеста в Лагосе, Нигерия / Facebook, AP

Полторы недели назад я смотрел видео о Кони 2012 года. После этого я написал краткий ответ из семи частей, который я последовательно разместил в своем аккаунте в Твиттере:

1 — От Сакса до Кристофа, детей-невидимок и TED, самой быстрорастущей отраслью в США является Промышленный комплекс Белого Спасителя.
— Теджу Коул (@tejucole) 8 марта 2012 г.

2 — Белый спаситель поддерживает жестокую политику утром, основывает благотворительные организации днем и получает награды вечером.
— Теджу Коул (@tejucole) 8 марта 2012 г.

3- Банальность зла превращается в банальность сентиментальности. Мир — не что иное, как проблема, которую нужно решить с энтузиазмом.
— Теджу Коул (@tejucole) 8 марта 2012 г.

4- Этот мир существует просто для того, чтобы удовлетворить потребности — в том числе, что важно, сентиментальные потребности — белых людей и Опры.
— Теджу Коул (@tejucole) 8 марта 2012 г.

5- Промышленный комплекс «Белый Спаситель» не о справедливости. Речь идет о большом эмоциональном переживании, подтверждающем привилегию.
— Теджу Коул (@tejucole) 8 марта 2012 г.

6. Лихорадочное беспокойство за этого ужасного африканского военачальника. Но почти 1,5 миллиона иракцев погибли в результате предпочтительной войны Америки. Беспокоитесь об этом.
— Теджу Коул (@tejucole) 8 марта 2012 г.

7. Я глубоко уважаю американскую сентиментальность, как раненого бегемота.Вы должны следить за этим, потому что вы знаете, что это смертельно опасно.
— Теджу Коул (@tejucole) 8 марта 2012 г.

Эти твиты были ретвитированы, перенаправлены и широко распространены среди читателей. Они перешли за пределы Twitter в блоги, Tumblr, Facebook и другие сайты; Мне сказали, что они вызвали ожесточенные споры. С течением времени твиты полностью воспроизводились на сайтах The Atlantic и The New York Times , а также появлялись на немецких, испанских и португальских сайтах.Друг написал мне, что четвертый твит, в котором дерзко проверяет имя Опры, был упомянут по телевидению Fox.

Эти мои предложения, написанные без особого обдумывания, задело нерв. Я получил ответ от многих людей, которые были благодарны за то, что прочитали их. Я получил ответ от многих других, которые были разочарованы или разъярены. Многие, слишком многие, чтобы сосчитать, называли меня расистом. Один человек сравнил меня с Мау-Мау. Автор Atlantic , который воспроизвел их, соглашаясь с моими более широкими тезисами, охарактеризовал язык, на котором они были выражены, как «негодование.

В эти выходные я слушал радиоинтервью, данное журналистом, лауреатом Пулитцеровской премии –, Николасом Кристофом. Кристоф наиболее известен своей регулярной колонкой в The New York Times, , в которой он часто рассказывает о своей деятельности или активности других жителей Запада. Когда я увидел видео Kony 2012, я обнаружил, что он тонально похож на подход Кристофа, и именно поэтому я упомянул его в первом из семи моих твитов.

Подробнее об Армии сопротивления Господа

Эти твиты, хотя и непреднамеренные, были преднамеренными по своей иронии и серьезности.Я писал их не для того, чтобы набрать дешевые очки, не говоря уже о том, чтобы обидеть чьи-то чувства. Я считал, что определенный вид языка слишком редко встречается в нашем публичном дискурсе. Я писатель. Я использую тонкости, и моя цель в написании романа — оставить читателя не знающим, что думать. В хорошем романе не должно быть смысла.

Но в политической сфере есть место для прямой речи, и в последние несколько лет в Соединенных Штатах наблюдается сдерживающий эффект на определенный вид прямой речи, касающейся прав.Президент опасается, что его будут считать «рассерженным черным человеком». Цветные люди, женщины и геи, которые теперь имеют больший доступ к центрам влияния, чем когда-либо прежде, вынуждены вести себя хорошо, когда говорят о своей борьбе. Ожидается, что мы можем говорить о грехах, но никого нельзя считать грешником: газеты любят описывать слова или дела как «расовые» даже в тех случаях, когда честнее было бы сказать «расистские»; мы согласны с тем, что женоненавистничество широко распространено, но женоненавистников нигде не найти; гомофобия — это проблема, но гомофобов нет.Одним из совокупных эффектов этого контролируемого языка является то, что когда кто-то осмеливается указать на что-то столь очевидное, как привилегия белых, это рассматривается как излишне провокационный. У маргинальных голосов в Америке все меньше и меньше возможностей открыто говорить о том, от чего они страдают; эффект этой принудительной вежливости состоит в том, что эти голоса фальсифицируются или полностью блокируются из дискурса.

Только в контексте этого стерилизованного языка мои довольно ручные твиты можно рассматривать как крайние. Интервьюер радио-шоу, которое я слушал, спросил Кристофа, слышал ли он обо мне.«Конечно», — сказал он. Она спросила его, что он думает о моей критике. Его ответ был обдуманным и гениальным, но то, что он сказал, обеспокоило меня больше, чем могла бы вызвать вспышка гнева. о том, что Африка, как они ее видят, определяется военачальником, который делает особенно жестокие вещи, и о восприятии того, что американцы собираются прокатиться на белом коне и разрешить эту проблему.Мне, однако, кажется еще более неудобным думать, что мы, белые американцы, не должны вмешиваться в гуманитарную катастрофу, потому что у жертв другой цвет кожи.

Вот некоторые из «образованных африканцев среднего класса», которые Кристоф, независимо от того, знаком ли он со всеми ими и их работой или нет, решил поспорить с: угандийской журналисткой Розбелл Кагумире, которая освещала Армию сопротивления Бога в 2005 году и сделал красноречивый видеоответ на Kony 2012; Ученый из Уганды Махмуд Мамдани, один из ведущих мировых специалистов по Уганде и автор основательного ответа на политическую ошибочность «Детей-невидимок»; и американский писатель эфиопско-американского происхождения Динау Менгесту, который разыскал Джозефа Кони, встретился с его помощниками и недавно написал блестящее эссе о том, как Кони 2012 ошибается.У них другой взгляд на то, что Кристоф называет «гуманитарной катастрофой», и это может быть связано с тем, что они видят за этим более серьезные бедствия: милитаризацию более бедных стран, недальновидную сельскохозяйственную политику, добычу ресурсов, поддержку коррумпированных правительств и поразительная сложность длительных ожесточенных конфликтов на обширной и разнообразной территории.

Я хочу действовать осторожно: я не обвиняю Кристофа в расизме и не считаю его расистом в каком-либо смысле. Не сомневаюсь, что у него доброе сердце.Слушая его по радио, я начал думать, что мы могли бы все сгладить за пару кружек пива. Но именно это меня и беспокоит. Вот что заставило меня сравнить американскую сентиментальность с «раненым бегемотом». Его доброе сердце не всегда позволяет ему мыслить созвездиями. Он не соединяет точки и не видит сил, стоящих за отдельными «бедствиями». Все, что он видит, — это голодные рты, и он, в своей собственной журналистской пропаганде, кладет еду в эти рты так быстро, как только может.Все, что он видит, — это потребность, и он не видит необходимости аргументировать эту потребность.

Но я не согласен с подходом Invisible Children, в частности, и промышленного комплекса «Белый Спаситель» в целом, потому что делать хорошую работу — это гораздо больше, чем просто «что-то изменить». Есть принцип «Сначала не навреди». Есть идея, что с теми, кому помогают, нужно консультироваться по волнующим их вопросам.

Все это пишу с разных позиций.Я пишу как африканец, чернокожий мужчина, живущий в Америке. Я каждый день подвергаюсь многочисленным микроагрессиям американского расизма. Я также пишу это как американец, пользующийся многими привилегиями, которые дает американский паспорт и возможность проживания в этой стране. Я вовлекаюсь в эту критику привилегий: мои собственные привилегии класса, пола и сексуальности недостаточно изучены. Мой мобильный телефон, вероятно, был изготовлен плохо обращающимися рабочими на китайском заводе. Колтан в телефоне, вероятно, связан с раздираемой конфликтом Демократической Республикой Конго.Я не обманываюсь тем, что не причастен к этим транснациональным сетям репрессивных практик.

И все это я пишу как романист и писатель: я чуток к силе повествования. Когда Джейсон Рассел, рассказчик видео Kony 2012, показал своему жизнерадостному светловолосому малышу фотографию Джозефа Кони как воплощения зла (сердитый темнокожий мужчина) и его друга Джейкоба как представителя беспомощности (симпатичный африканец) Мне было интересно, как у маленького мальчика Рассела разовьется тонкое чувство жизни других людей, особенно людей другой расы, отличной от его собственной.Как этот маленький мальчик смог бы понять, что другие обладают автономией? что их право на жизнь не исключает права на самоуважение? В другом контексте Джон Бергер однажды написал: «Певец может быть невиновен; никогда не песня ».

В чем Африке более остро, чем в обвинительном заключении Кони, так это в более справедливом гражданском обществе, более прочной демократии и более справедливой системе правосудия.

Одна песня, которую мы слышим слишком часто, — это песня, в которой Африка служит фоном для белых фантазий о завоевании и героизме.От колониального проекта до Out of Africa до Constant Gardener и Kony 2012 Африка предоставила пространство, на которое можно легко проецировать белое эго. Это освобожденное пространство, в котором не действуют обычные правила: никто из Америки или Европы не может поехать в Африку и стать богоподобным спасителем или, по крайней мере, удовлетворить свои эмоциональные потребности. Многие сделали это под лозунгом «изменить мир к лучшему». Заявление об этой очевидной и хорошо подтвержденной истине не делает меня расистом или мау-мау.Это действительно выдаёт меня как «образованного африканца из среднего класса», и я признаю себя виновным по предъявленным обвинениям. (Стоит также отметить, что есть и другие образованные африканцы из среднего класса, которые видят в этом вопрос иначе, чем я. Это то, что люди, образованные и не только, делают: они оценивают информацию и иногда не соглашаются друг с другом.)

В любом случае Мы с Кристофом полностью согласны в одном: во многих частях африканского континента происходит много не так, как должно быть. Мне повезло в жизни, но это не значит, что я не видел и не испытал африканскую бедность на собственном опыте.Я вырос в стране военных переворотов и экономически разрушительных программ «структурной перестройки», навязанных МВФ. Настоящая боль Африки — это не вымысел.

И мы также согласны в другом: существует внутреннее этическое побуждение, которое требует, чтобы каждый из нас служил справедливости настолько, насколько он или она может. Но помимо непосредственного внимания, которое он справедливо уделяет голодным ртам, детям-солдатам или изнасилованным гражданским лицам, существуют более сложные и более распространенные проблемы. Существуют серьезные проблемы управления, инфраструктуры, демократии и правопорядка.Эти проблемы непросты сами по себе и не сводятся к лозунгам. Такие проблемы сложны и очень локальны.

Как, например, мог действующий из лучших побуждений американец «помочь» такому месту, как Уганда сегодня? Я считаю, что все начинается с некоторого смирения по отношению к людям в тех местах. Все начинается с некоторого уважения к роли народа Уганды в его собственной жизни. Угандийцы проделали и продолжают проделывать огромную работу по улучшению своей собственной страны, и невежественные комментарии (я видел много) о том, что «мы должны спасти их, потому что они не могут спастись сами», могут не изменю этот факт.

Позвольте мне привести в это обсуждение пример из африканской страны, которую я очень хорошо знаю. Ранее в этом году сотни тысяч нигерийцев вышли на улицы своей страны в знак протеста против решения правительства отменить субсидию на бензин. Эта субсидия широко рассматривалась как одно из немногих благ, приносящих катастрофическое нефтяное богатство страны. Но что сделало эти протесты такими обнадеживающими, так это то, что они касались не только отмены субсидий. В Нигерии одно из самых коррумпированных правительств в мире, и протестующие явно требовали с этим что-то сделать.Акции протеста продолжались несколько дней, что не давало им личной жизни. Несколько молодых людей были застрелены, и движение в конечном итоге было подавлено, когда профсоюзные лидеры капитулировали и армия вышла на улицы. В общепринятых терминах движение не было «успешным». Но что-то важное изменилось в политическом сознании населения Нигерии. Для меня и для многих людей, которых я знаю, протесты дали нам возможность гордиться Нигерией, многие из нас впервые в жизни.

Это не та история, которую легко описать в статье, не говоря уже о том, чтобы сделать вирусное видео. В конце концов, не существует простого требования и, поскольку коррупция является повсеместным явлением, нет единственного злодея, которого можно было бы свергнуть. В повествованиях о странах третьего мира, конечно, нет «персонажа-моста», эвфемизма Кристофа для белых спасителей, который делает историю более привлекательной для американских зрителей. И все же история протестного движения Нигерии — одна из самых важных в этом году в странах Африки к югу от Сахары.Мужчины и женщины всех классов и возрастов отстаивали то, что считали правильным; они шли мирно; они защищали друг друга и давали друг другу пищу и питье; Христиане стояли на страже, пока мусульмане молились, и наоборот; и они без страха говорили со своими лидерами о той стране, которую они хотели видеть. Все это произошло без каких-либо крутых американских 20-сантиметровых героев.

Джозефа Кони больше нет в Уганде, и он больше не представляет угрозы, которой был, но он удобный злодей для тех, кому нужен удобный злодей.В чем Африка нуждается более остро, чем обвинительный акт Кони, так это в более справедливом гражданском обществе, более прочной демократии и более справедливой системе правосудия. Это строительные леса, на которых можно построить инфраструктуру, безопасность, здравоохранение и образование. Как мы поощряем голоса, подобные тем, что были в нигерийских массах, вышедших в январе этого года, или тем, кто участвует в борьбе за развитие угандийской демократии?

Если американцы хотят заботиться об Африке, возможно, им стоит подумать об оценке американской внешней политики, в которой они уже играют прямую роль посредством выборов, прежде чем они навяжут себя самой Африке.Дело в том, что Нигерия входит в пятерку крупнейших поставщиков нефти в США, и американская политика в первую очередь заинтересована в потоках этой нефти. Американское правительство не сочло нужным поддерживать протесты Нигерии. (Хотя Государственный департамент выступил с одобрительным заявлением: «Мы считаем, что нигерийский народ имеет право на мирный протест, мы хотим, чтобы он мирно протестовал, и мы также призываем нигерийские службы безопасности уважать право народные протесты и профессиональное поведение при борьбе с забастовками », — от этого пахло шаблонной риторикой, и, что неудивительно, из этого ничего не вышло.) Это было как и ожидалось; под флагом «американских интересов» нефть стоит на первом месте. Под тем же знаменем НАФТА уничтожило средства к существованию фермеров, выращивающих кукурузу в Мексике. Гаитянские фермеры, выращивающие рис, понесли ужасающие потери из-за наводнения Гаити субсидированным американским рисом. В последние три года в Гондурасе разыгрывается кошмар: государственный переворот и американская милитаризация этой страны способствовали конфликту, в котором уже были убиты сотни активистов и журналистов.Египетские военные, которые сейчас подавляют когда-то обнадеживающее движение страны за демократию и убивают при этом десятки активистов, существуют на 1,3 миллиарда долларов ежегодной помощи США. Это литания, которая многим будет знакома. Для других это будет новостью. Но, знакомо это или нет, это имеет отношение к нашим представлениям о невиновности и нашему праву на «помощь».

Давайте начнем нашу деятельность прямо здесь: с основанного на деньгах злодейства, лежащего в основе американской внешней политики. Сделать это означало бы отказаться от иллюзии, что сентиментальная потребность «что-то изменить» превосходит все другие соображения.Невинные герои не всегда понимают, что они играют полезную роль для людей, у которых гораздо более циничные мотивы. Промышленный комплекс «Белый Спаситель» — это клапан для сброса невыносимого давления, которое встроено в систему, построенную на грабежах. Мы можем участвовать в экономическом разрушении Гаити в течение долгих лет, но когда случается землетрясение, мы чувствуем себя хорошо, чтобы отправить по 10 долларов в фонд спасения. В принципе, я не возражаю против таких пожертвований (я часто делаю их сам), но мы должны делать такие вещи только с осознанием того, что еще происходит.Если мы собираемся вмешиваться в жизнь других, небольшая должная осмотрительность является минимальным требованием.

Успех Кони в 2012 году будет означать усиление милитаризации антидемократического правительства Йовери Мусевени, которое находится у власти в Уганде с 1986 года и играет важную роль в самом смертоносном продолжающемся конфликте в мире — войне в Конго. Но тем, кому привилегия позволяет отрицать созвездие мышления, понравится игнорировать этот факт. Есть и другие тревожные связи, не в последнюю очередь то, что Мусевени, похоже, является U.С. прокси в своих негласных боях с боевиками в Судане и, особенно, в Сомали. Кто санкционирует эти конфликты? Под чьим руководством и контролем они проводятся? Кого убивают и почему?

Все это уводит нас довольно далеко от молодых американцев с новым лицом, использующих силу YouTube, Facebook и чистый энтузиазм, чтобы изменить мир. Певец может быть невиновен; никогда не песня.

Комплекс SWI / SNF — механорегулируемый ингибитор YAP и TAZ

Кадоч, К. и Крэбтри, Г. Р. Комплексы ремоделирования SWI / SNF хроматина млекопитающих и рак: механистические открытия, полученные из геномики человека. Sci. Adv . 1 , e1500447 (2015).

ADS Статья Google ученый

Totaro, A., Panciera, T. & Piccolo, S. восходящие сигналы YAP / TAZ и нисходящие ответы. Нац. Ячейка Биол . 20 , 888–899 (2018).

CAS Статья Google ученый

Panciera, T., Azzolin, L., Cordenonsi, M. & Piccolo, S. Механобиология YAP и TAZ в физиологии и болезнях. Нац. Rev. Mol. Ячейка Биол . 18 , 758–770 (2017).

CAS Статья Google ученый

Rafiee, M. R., Girardot, C., Sigismondo, G. & Krijgsveld, J. Расширение схемы плюрипотентности путем селективного выделения белков, связанных с хроматином. Мол. Ячейка 64 , 624–635 (2016).

CAS Статья Google ученый

Ege, N. et al. Количественный анализ показывает, что актин и киназы семейства Src регулируют ядерный YAP1 и его экспорт. Ячейка Syst . 6 , 692–708 (2018).

CAS Статья Google ученый

Chen, H. I. и Sudol, M. WW-домен Yes-ассоциированного белка связывает богатый пролином лиганд, который отличается от консенсуса, установленного для модулей связывания с гомологией Src 3. Proc. Natl Acad. Sci. США 92 , 7819–7823 (1995).

ADS CAS Статья Google ученый

Dupont, S. et al. Роль YAP / TAZ в механотрансдукции. Природа 474 , 179–183 (2011).

CAS Статья Google ученый

Wang, H. et al. Реставрация ДНК, управляемая BRCA1 / FANCD2 / BRG1, стабилизирует состояние дифференцировки эпителиальных клеток молочной железы человека. Мол. Ячейка 63 , 277–292 (2016).

CAS Статья Google ученый

Cordenonsi, M. et al. TAZ-преобразователь Hippo придает клеткам рака молочной железы признаки, связанные со стволовыми клетками рака. Cell 147 , 759–772 (2011).

CAS Статья Google ученый

10.

Zanconato, F., Cordenonsi, M. & Piccolo, S.YAP / TAZ у истоков рака. Cancer Cell 29 , 783–803 (2016).

CAS Статья Google ученый

11.

Eroglu, E. et al. Комплекс SWI / SNF предотвращает реверсию клонов и индуцирует формирование временного паттерна в нервных стволовых клетках. Cell 156 , 1259–1273 (2014).

CAS Статья Google ученый

12.

Panciera, T.и другие. Индукция расширяемых тканеспецифичных стволовых клеток / клеток-предшественников посредством временной экспрессии YAP / TAZ. Cell Stem Cell 19 , 725–737 (2016).

CAS Статья Google ученый

13.

Zhang, N. et al. Супрессор опухоли Merlin / NF2 действует через онкобелок YAP, регулируя гомеостаз тканей у млекопитающих. Dev. Ячейка 19 , 27–38 (2010).

CAS Статья Google ученый

14.

Benhamouche, S. et al. Nf2 / Merlin контролирует гомеостаз предшественников и туморогенез в печени. Genes Dev . 24 , 1718–1730 (2010).

CAS Статья Google ученый

15.

Бакири Л. и Вагнер Э. Ф. Мышиные модели рака печени. Мол. Онкол . 7 , 206–223 (2013).

CAS Статья Google ученый

16.

Плесснер М., Мелак М., Шиншилла П., Баарлинк С. и Гроссе Р. Образование и реорганизация ядерного F-актина при распространении клеток. J. Biol. Chem . 290 , 11209–11216 (2015).

CAS Статья Google ученый

17.

Гросс, Р. и Вартиайнен, М. К. Быть или не собираться: прогрессирование в ядерные актиновые филаменты. Нац. Rev. Mol. Ячейка Биол . 14 , 693–697 (2013).

CAS Статья Google ученый

18.

Baarlink, C., Wang, H. & Grosse, R. Сборка ядерной актиновой сети с помощью форминов регулирует коактиватор SRF MAL. Наука 340 , 864–867 (2013).

ADS CAS Статья Google ученый

19.

Rando, O.J., Zhao, K., Janmey, P. & Crabtree, G.R. Связывание фосфатидилинозитол-зависимого актинового филамента SWI / SNF-подобным комплексом ремоделирования хроматина BAF. Proc. Natl Acad. Sci. США 99 , 2824–2829 (2002).

ADS CAS Статья Google ученый

20.

Miralles, F., Posern, G., Zaromytidou, A. I. & Treisman, R. Динамика актина контролирует активность SRF путем регулирования его коактиватора MAL. Cell 113 , 329–342 (2003).

CAS Статья Google ученый

21.

Zanconato, F. et al. Полногеномная ассоциация между YAP / TAZ / TEAD и AP-1 в энхансерах стимулирует онкогенный рост. Нац. Ячейка Биол . 17 , 1218–1227 (2015).

CAS Статья Google ученый

22.

Aragona, M. et al. Механическая контрольная точка контролирует многоклеточный рост посредством регулирования YAP / TAZ факторами процессинга актина. Cell 154 , 1047–1059 (2013).

CAS Статья Google ученый

23.

Benham-Pyle, B.W., Pruitt, B.L. и Nelson, W.J. Механическая деформация индуцирует E-кадгерин-зависимую активацию Yap1 и β-катенина для запуска входа в клеточный цикл. Наука 348 , 1024–1027 (2015).

ADS CAS Статья Google ученый

24.

Skibinski, A. et al. Преобразователь Hippo TAZ взаимодействует с комплексом SWI / SNF, чтобы регулировать преданность клонам эпителия молочной железы. Cell Rep . 6 , 1059–1072 (2014).

CAS Статья Google ученый

25.

Komuro, A., Nagai, M., Navin, NE и Sudol, M. WW-домен, содержащий белок YAP, ассоциируется с ErbB-4 и действует как активатор котранскрипции для карбоксиконцевого фрагмента ErbB-4, который перемещается в ядро. J. Biol. Chem . 278 , 33334–33341 (2003).

CAS Статья Google ученый

26.

Azzolin, L. et al. Роль TAZ как посредника передачи сигналов Wnt. Cell 151 , 1443–1456 (2012).

CAS Статья Google ученый

27.

Sif, S., Saurin, A.J., Imbalzano, A.N. & Kingston, R.E. Очистка и характеристика mSin3A-содержащих Brg1 и hBrm комплексов ремоделирования хроматина. Genes Dev . 15 , 603–618 (2001).

CAS Статья Google ученый

28.

Guan, B. et al. Мутация и потеря экспрессии ARID1A при эндометриоидной карциноме низкой степени злокачественности. Am. J. Surg. Патол . 35 , 625–632 (2011).

Артикул Google ученый

29.

Maherali, N. et al. Высокоэффективная система для создания и изучения индуцированных человеком плюрипотентных стволовых клеток. Cell Stem Cell 3 , 340–345 (2008).

CAS Статья Google ученый

30.

Stewart, S.A. et al. Доставляемое лентивирусом стабильное молчание генов с помощью РНКи в первичных клетках. РНК 9 , 493–501 (2003).

CAS Статья Google ученый

31.

Hughes, C. S. et al. Сверхчувствительный протеомный анализ с использованием технологии парамагнитных шариков. Мол. Syst. Биол . 10 , 757 (2014).

Артикул Google ученый

32.

Gao, X. et al. Плюрипотентность ES клеток и формирование зародышевого листка требуют компонента ремоделирования хроматина SWI / SNF BAF250a. Proc. Natl Acad. Sci. США 105 , 6656–6661 (2008).

ADS CAS Статья Google ученый

33.

Schuler, M., Dierich, A., Chambon, P. & Metzger, D. Эффективный управляемый во времени целевой соматический мутагенез в гепатоцитах мыши. Бытие 39 , 167–172 (2004).

CAS Статья Google ученый

34.

Zhu, Y. et al. Нарушение функции NF1 в нейронах вызывает аномальное развитие коры головного мозга и реактивный глиоз в головном мозге. Genes Dev . 15 , 859–876 (2001).

CAS Статья Google ученый

35.

Azzolin, L. et al. Включение YAP / TAZ в комплекс деструкции β-catenin управляет ответом Wnt. Cell 158 , 157–170 (2014).

CAS Статья Google ученый

36.

Morsut, L. et al. Отрицательный контроль активности Smad с помощью эктодермина / Tif1γ формирует паттерны эмбриона млекопитающих. Развитие 137 , 2571–2578 (2010).

CAS Статья Google ученый

37.

Rempe, D. et al. Экспрессия трансгена Synapsin I Cre у мышей-самцов вызывает рекомбинацию зародышевой линии у потомства. Бытие 44 , 44–49 (2006).

CAS Статья Google ученый

Эрнест Джонс | Британский психоаналитик

Эрнест Джонс , полностью Альфред Эрнест Джонс (родился 1 января 1879 года, Росфелин, Гламорган, Уэльс, умер 11 февраля 1958 года, Лондон, Англия), психоаналитик и ключевая фигура в продвижение его профессии в Великобритании. Один из ближайших соратников и стойких сторонников Зигмунда Фрейда, он написал исчерпывающую трехтомную биографию Фрейда.

После получения медицинской степени (1903 г.) Джонс стал членом Королевского колледжа врачей в Лондоне (1904 г.) и занимал несколько последовательных больничных и клинических должностей в этом городе. Его интерес постепенно сместился с клинической медицины на неврологию, психиатрию и, в конечном итоге, психоанализ. Вместе с Карлом Юнгом он организовал первый психоаналитический конгресс в Зальцбурге, Австрия (1908), где он впервые встретился с Фрейдом. В том же году он уехал в Канаду, где начал четырехлетний период в больнице общего профиля Торонто и рискнул преподавать психоанализ и экспериментировать с психоаналитическими техниками.Основной вклад Джонса в психоаналитическую теорию возник в результате его применения психоаналитических принципов к антропологии, фольклору, искусству и литературе. Его знаменитое эссе (1910), объясняющее характер Гамлета с точки зрения Эдипова комплекса, позже было переработано и опубликовано в виде книги как Гамлет и Эдип (1949).

Джонс принимал активное участие в создании Американской психоаналитической ассоциации (1911). Он написал монографии по изучению внушения, символизма, формирования характера и навязчивых неврозов; эти работы были собраны в статей по психоанализу (1913).После его возвращения в Лондон в 1913 году он занимался психоанализом. Он основал институт и клинику, а также Международный журнал психоанализа , который редактировал до 1939 года. Во многом благодаря его усилиям Британская медицинская ассоциация признала психоанализ в 1929 году. Англия и другие страны. После захвата Австрии нацистами в 1938 году Джонс сыграл решающую роль, позволив больному Фрейду и его семье переехать в Лондон.С 1944 года он потратил много времени на подготовку своей авторитетной биографии Жизнь и творчество Зигмунда Фрейда (1953–57).

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

В вашем браузере отключены файлы cookie.Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, используйте кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie.Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Комплекс Ccr4-Not является ключевым регулятором экспрессии эукариотических генов

Обзор

РНК Wiley Interdiscip Rev . 2016 июл; 7 (4): 438-54. DOI: 10.1002 / wrna.1332. Epub 2016 29 января.
Принадлежности Расширять
Принадлежности
¹ Кафедра микробиологии и молекулярной медицины, CMU, Женева, Швейцария.
² Институт генетики и геномики, Женева, Швейцария.
Бесплатная статья PMC
Элемент в буфере обмена
Обзор
Мартина Колларт. Wiley Interdiscip Rev RNA. 2016 июл.
Бесплатная статья PMC Показать детали Показать варианты
Показать варианты
Формат АннотацияPubMedPMID
РНК Wiley Interdiscip Rev . 2016 июл; 7 (4): 438-54. DOI: 10.1002 / wrna.1332. Epub 2016 29 января.
Принадлежности
¹ Кафедра микробиологии и молекулярной медицины, CMU, Женева, Швейцария.
² Институт генетики и геномики, Женева, Швейцария.
Элемент в буфере обмена
Полнотекстовые ссылки Опции CiteDisplay
Показать варианты
Формат АннотацияPubMedPMID
Абстрактный
Комплекс Ccr4-Not представляет собой мультисубъединичный комплекс, присутствующий во всех эукариотах, который способствует регулированию экспрессии генов на всех этапах, от продукции информационных РНК (мРНК) в ядре до их деградации в цитоплазме.В ядре он влияет на посттрансляционные модификации матрицы хроматина, которую необходимо ремоделировать для транскрипции, он присутствует в сайтах транскрипции и ассоциируется с факторами транскрипции, а также с удлиняющей полимеразой, он взаимодействует с факторами, которые подготавливают новый транскрипт для экспорта в цитоплазму и, наконец, важен для контроля качества ядер и влияет на экспорт мРНК. В цитоплазме он присутствует в полисомах, где мРНК транслируются, и в гранулах РНК, куда мРНК будут перенаправляться при ингибировании трансляции.Он влияет на трансляцию мРНК и необходим во время трансляции, с одной стороны, для ко-трансляционных белковых взаимодействий, а с другой стороны, для сохранения трансляции, которая останавливается. Это один из важных игроков при контроле качества совместного перевода. Он также взаимодействует с факторами, которые будут репрессировать трансляцию или индуцировать декапирование мРНК при рекрутировании в трансляционную матрицу. Наконец, Ccr4-Not несет деаденилирующие ферменты и играет ключевую роль в распаде мРНК, распаде общей мРНК, который следует за нормальным завершением трансляции, ко-трансляционному распаду мРНК транскриптов, на которых рибосомы устойчиво останавливаются или которые несут несмысловые мутации, и, наконец, мРНК. распад, вызванный внешней сигнализацией об изменении генетического программирования.Ccr4-Not — главный регулятор экспрессии эукариотических генов. WIREs RNA 2016, 7: 438-454. doi: 10.1002 / wrna.1332 Для получения дополнительных ресурсов, связанных с этой статьей, посетите веб-сайт WIREs.
© 2016 Авторы. РНК WIREs, опубликованная Wiley Periodicals, Inc.
Цифры
Рисунок 1

Линейное и мультипликационное изображение…
Рисунок 1

Линейное и мультипликационное представление субъединиц комплекса Ccr4-Not.(а) Ядро Not1…
Рисунок 1
Линейное и мультипликационное представление субъединиц комплекса Ccr4-Not. (a) Основная субъединица Not1 изображена с доменами, охарактеризованными как стыковочные сайты для других ядерных субъединиц. Имена, выбранные для основных субъединиц, описаны в таблице 1. DEDD и EEP относятся к сигнатурным доменам субъединиц каталитической деаденилазы, а RING — к сигнатурному домену субъединицы E3 лигазы.НЕ-бокс является доменом гомологии, общим для нескольких белков Not, а RRM является предполагаемым мотивом распознавания РНК в Not4. Адаптировано из ссылки 20 для включения стыковки Not4, определенной в ссылке 22. С-концевой домен Not4 связывает боковую поверхность первой единицы HEAT-повтора С-концевого домена Not1, в то время как Not2 вместе с С-концевым доменом. Not5 связывают верхнюю и нижнюю поверхности. Следовательно, взаимодействия происходят в основном на отдельных поверхностях С-концевого домена Not1. 22 (b) Карикатурное представление L-формы комплекса Ccr4-Not, определенного с помощью электронной микроскопии 23, с ожидаемым положением ядерных субъединиц на каркасе Not1.20 Где Not3 и Caf130 стыкуются с Not1, неизвестно, поэтому мы поместили Not3 в контакт с Not2 и Not5 из-за общих мутантных фенотипов и дрожжевого Caf130 на N-конце Not1, где Not10 и Not11 связываются у мух.
Рисунок 2

Мультяшное изображение взаимодействий…
Рисунок 2

Мультяшное изображение взаимодействий Ccr4-Not с компонентами, имеющими отношение к инициации транскрипции…
фигура 2
Мультяшное изображение взаимодействий Ccr4-Not с компонентами, имеющими отношение к инициации транскрипции (а).и с компонентами, которые могут рекрутировать Ccr4-Not в единицу транскрипции (b). ТФ, фактор транскрипции; TFB, сайт связывания фактора транскрипции; Уби — убиквитинирование; Ас, ацетилирование; Me ₃, триметилирование.
Рисунок 3

Представление ролей…
Рисунок 3

Представление ролей Ccr4-Not в удлинении транскрипции.По материалам работ 15,…
Рисунок 3
Представление ролей Ccr4-Not в удлинении транскрипции. Адаптировано из работ 15, 61. Справа изображен RNAPII, который встречает блок в транскрипции во время фазы продуктивной элонгации и откатывается назад. На верхней левой панели изображено повторное связывание и высвобождение транскрипта с помощью Ccr4-Not, которое вызывает перестройку 3′-конца РНК в активный сайт и способствует возобновлению элонгации с помощью RNAPII.На нижней левой панели изображено, что Ccr4-Not увеличивает рекрутирование TFIIS в комплексы RNAPII с обратным отслеживанием. Это усиливает расщепление смещенного транскрипта в обратном RNAPII с помощью TFIIS, позволяя возобновить удлинение.
Рисунок 4

Мультфильм, изображающий различные взаимодействия…
Рисунок 4

Рисунок, изображающий различные взаимодействия между Ccr4-Not и компонентами, участвующими в экспорте мРНК…
Рисунок 4
Рисунок, изображающий различные взаимодействия между Ccr4-Not и компонентами, способствующими экспорту мРНК и контролю качества ядер.Ccr4-Not взаимодействует с Hpr1 и Mft1 или комплексом THO / TREX, который включает Sub2, с ядерным поли (A) связывающим белком Nab2, с Mlp1, и необходим для взаимодействия экзонуклеазы Rrp6 с ее кофактором РНК Mtr4. геликаза. Включены некоторые другие компоненты, участвующие в экспорте, такие как Mex67, Mtr2, Yra1 и Mlp1. NPC: комплекс ядерных пор.
Рисунок 5

Комплекс Ccr4 ‐ Not играет много…
Рисунок 5

Комплекс Ccr4 ‐ Not играет множество ролей в процессе перевода.(a) Not5 — это…
Рисунок 5.
Комплекс Ccr4 ‐ Not играет множество ролей в процессе перевода. (a) Not5 необходим для присутствия ко-шаперона R2TP в полисомах, продуцирующих Rpb1, для образования растворимого компетентного к сборке Rpb1, включая Hsp90 и субъединицы Rpb4, 5, 6, 7 и 9, которые будут формировать RNAPII. (b) Not4, вероятно, необходим ко-трансляционно для взаимодействия шаперона Ecm29 с субъединицами протеасомы регуляторных частиц (RP) и целостности протеасомы.CP: частица ядра. (c) Not4 играет важную роль во время контроля качества совместного перевода. Он сообщил о положительных и отрицательных эффектах на инициацию трансляции, способность убиквитинировать застопорившийся пептид или, наконец, инициировать распад мРНК посредством Ccr4-не зависимого деаденилирования. (d) При привлечении РНК-связывающим белком (RBP) Ccr4-Not опосредует репрессию трансляции независимым от деаденилирования способом посредством рекрутирования белка 4E-T. 4E-T взаимодействует с eIF4E и компонентами декапирования, связанными с 3 ‘и 5’-концами мРНК, такими как белки LSM, PAT1 и DDX6.DDX6 также может напрямую взаимодействовать с Not1. (e) Мультфильм с моделью как положительного, так и отрицательного влияния Not4 на перевод.
Рисунок 6

Ccr4 ‐ Not является основным…
Рисунок 6

Ccr4-Not — основная эукариотическая деаденилаза.(a) Ccr4 ‐ Not может быть нанят на…
Рисунок 6
Ccr4-Not — основная эукариотическая деаденилаза. (a) Ccr4-Not может рекрутироваться в мРНК посредством взаимодействия между Caf1 и самим Tob1, связывающимся с PABP. Это может вызвать генерализованное деаденилирование мРНК при экспрессии Tob1. (b) Во время NMD у позвоночных фосфорилированный Upf1 может рекрутировать белки Smg5, 6 и 7. Smg6 является эндонуклеазой, которая действует избыточно по отношению к комплексу Ccr4-Not, рекрутируемому гетеродимером Smg5 / 7, посредством взаимодействия Smg7 и Pop2, вызывая распад мРНК.(c) RBPs могут связывать комплекс Ccr4-Not с мРНК-мишенями и приводить к деаденилированию, вероятно, после завершения нормальной трансляции. (d) Аппарат микро-РНК может связывать Ccr4-Not и вызывать деаденилирование мРНК после нормального завершения трансляции.
Рисунок 7

Ccr4 ‐ Not соединяет ядерную и…
Рисунок 7

Ccr4-Not связывает ядерную и цитоплазматическую фазы экспрессии генов.Взято из работы…
Рисунок 7
Ccr4-Not связывает ядерную и цитоплазматическую фазы экспрессии генов. Адаптировано из Ref 96. Ccr4-Not присутствует в сайтах транскрипции за счет взаимодействия с факторами транскрипции (TF) и с удлиняющимся RNAPII через Rpb4. Он может связываться с вновь продуцируемыми мРНК и экспортироваться в ядро с мРНП. В цитоплазме он будет способствовать регулированию трансляции и вызывать деградацию мРНК.Но это также будет способствовать сборке новых RNAPII, которые могут повторно войти в ядро, чтобы начать новые раунды транскрипции.
Все фигурки (7)
использованная литература
Колларт М.А., Тиммерс Х.Т. Эукариотический комплекс Ccr4-not: регуляторная платформа, объединяющая метаболизм мРНК с клеточными сигнальными путями? Prog Nucleic Acid Res Mol Biol 2004, 77: 289–322.- PubMed
Денис С.Л., Чен Дж. Комплекс CCR4-NOT играет различные роли в метаболизме мРНК. Prog Nucleic Acid Res Mol Biol 2003, 73: 221–250. — PubMed
Collart MA.Глобальный контроль экспрессии генов в дрожжах с помощью комплекса Ccr4-Not. Джин 2003, 313: 1–16. — PubMed
Колларт М.А., Панасенко О.О. Ccr4 — не комплекс. Джин 2012, 492: 42–53. — PubMed
Колларт М.А., Панасенко О.О., Николаев С.И.Субъединица Not3 / 5 комплекса Ccr4-Not: центральный регулятор экспрессии генов, который интегрирует сигналы между цитоплазмой и ядром в эукариотических клетках. Cell Signal 2013, 25: 743–751. — PubMed
Показать все 98 ссылок
Типы публикаций
Поддержка исследований, Non-U.С. Правительство
Условия MeSH
Регуляция экспрессии генов *
Мультиферментные комплексы / метаболизм *
Рибонуклеазы / метаболизм *
Трансактиваторы / метаболизм *
LinkOut — дополнительные ресурсы
Полнотекстовые источники
Другие источники литературы
Исследовательские материалы
[Икс]
цитировать
Копировать
Формат: AMA APA ГНД NLM
Комплекс Arp2 / 3 связывается и активируется двумя белками WASP.
Резюме
Комплекс актин-родственный белок 2 / актин-родственный белок 3 (Arp2 / 3) зародыширует новые актиновые филаменты в эукариотических клетках в ответ на сигналы от белков в Wiskott– Семейство белков синдрома Олдрича (WASP).Консервативный домен VCA белков WASP активирует комплекс Arp2 / 3, вызывая конформационные изменения и доставляя первый актиновый мономер дочернего филамента. Предыдущие модели активации вызывали единственную VCA, действующую на единственном сайте комплекса Arp2 / 3. Здесь мы показываем, что активация, скорее всего, связана с вовлечением двух различных сайтов в комплексе Arp2 / 3 двумя молекулами VCA, каждая из которых доставляет мономер актина. Один сайт находится на Arp3, а второй — на ARPC1 и Arp2. VCA на этих сайтах играют разные роли в активации.Наши находки согласовывают очевидно противоречивые данные литературы об активации VCA комплекса Arp2 / 3 и приводят к новой модели этого процесса.
Актиновый цитоскелет динамически ремоделируется, чтобы обеспечить протрузивные силы, необходимые для миграции, адгезии, поляризации и перемещения пузырьков клеток. Полимеризация мономеров актина в поляризованные филаменты генерирует часть механической энергии, управляющей этими процессами (1). Комплекс родственный актину белок 2 / родственный актину белок 3 (Arp2 / 3) играет центральную роль в динамике цитоскелета, контролируя зарождение филаментов.Эта асимметричная сборка из семи белков зарождает новые филаменты со стороны существующих филаментов (2, 3). Два из этих белков, Arp2 и Arp3, связаны с актином (4, 5) и служат первыми двумя субъединицами формирующегося филамента (6). Комплекс также содержит пять дополнительных белков: ArpC1, ArpC2, ArpC3, ArpC4 и ArpC5.
Зарождение актина комплексом Arp2 / 3 в значительной степени стимулируется консервативным С-концевым элементом VCA белков семейства белков синдрома Вискотта-Олдрича (WASP) (7, 8).Функционально VCA (также называемая WCA) может быть разделена на разные области, которые вносят вклад в разные аспекты активации Arp2 / 3. Это актин-связывающая V-область (альтернативно называемая Wh3-областью), центральная соединяющая C-область, которая имеет сходство последовательностей с V-областью (9, 10) и C-концевой A (кислотной) областью. Вместе регионы C и A (обозначаемые как CA) вносят большую часть энергии ассоциации для комплекса Arp2 / 3 (11) и могут управлять конформационными изменениями (12⇓-14).V-область связывает мономер актина (11, 15) и доставляет начальную субъединицу в формирующуюся дочернюю филамент (11, 16⇓ – 18). В дополнение к CA-индуцированным конформационным изменениям и доставке актина в V-область, участие материнского филамента, по-видимому, необходимо для Arp2 / 3-зависимого зарождения филаментов, обеспечивая тем самым разветвленную структуру результирующей сети (19, 20).
Исследования сшивания идентифицировали Arp3 (21⇓ – 23), Arp2 (21⇓ – 23), ArpC1 (21⇓⇓ – 24), ArpC3 (21, 22, 25) и ArpC5 (25) как потенциальные поверхности связывания СВУ.Было трудно объединить эти исследования в целостную структурную картину связывания VCA. Например, предполагалось, что область A связывает как ArpC1 (26), так и Arp3 (21), но эти субъединицы не контактируют друг с другом ни в ингибированной кристаллической структуре (27), ни в ЭМ-реконструкции ветви филамента (6 ). Далее, в то время как первоначальные исследования подчеркивали важность контактов CA: Arp3 и предполагали, что первый актин доставляется к Arp3 (11, 21, 28), более недавнее исследование SAXS поместило первый актин на Arp2 (9).Определение того, где CA область связывает комплекс Arp2 / 3 и где доставляется первый актин, являются важными компонентами механистического описания процесса нуклеации.
Неявно в этих конфликтующих моделях одно VCA доставляет один актин в комплекс Arp2 / 3, чтобы запустить нуклеацию. Однако недавно мы показали, что димеризация доменов VCA семейства WASP существенно увеличивает их активность, что свидетельствует о существовании множества сайтов связывания VCA в комплексе Arp2 / 3 (29). Эксперименты по конкурентному связыванию показали, что димерные VCA задействуют два сайта в комплексе Arp2 / 3 (29), один из которых благоприятствует VCA, а другой — отдельному лиганду Arp2 / 3, кортактину (8, 22).Это повысило вероятность того, что активация комплекса Arp2 / 3, даже с помощью мономерных VCA, может происходить посредством задействования обоих сайтов связывания. Последние технические достижения позволили нам напрямую изучить эту возможность (30, 31).
Здесь мы показываем, что при концентрациях в мкМ два пептида VCA одновременно связывают комплекс Arp2 / 3. Данные перекрестного связывания показывают, что одна кислотная область связывает ArpC1, а другая — Arp3. Обе эти VCA могут вмещать актин, когда они связаны с комплексом Arp2 / 3. Димер VCA, лишенный одной из двух V-областей, показывает очень низкую активность, что позволяет предположить, что доставка актина обоими V-областями необходима для активации с высокой эффективностью.Доставка актина к Arp3, по-видимому, оказывает наибольшее влияние на активацию. Мы предполагаем, что зародышеобразование происходит посредством сборки двух VCA, двух мономеров актина и комплекса Arp2 / 3, и предлагаем структурную модель этого интермедиата.
Результаты
Два разных сайта связывания WASP VCA на комплексе Arp2 / 3.
Мы использовали мультисигнальный метод аналитического ультрацентрифугирования скорости седиментации (SVAUC) для определения стехиометрии связывания меченой Alexafluor-488 VCA (называемой VCA *) с комплексом Arp2 / 3 (рис.1 и рис. S1 A — C в приложении SI ; см. также Дополнительные материалы и методы в приложении SI ). Этот подход не основан на измерении массы и, таким образом, позволяет избежать неопределенности, связанной с такими измерениями в сложных системах. Вместо этого стехиометрия комплекса VCA-Arp2 / 3 определяется непосредственно по количеству VCA *, соприкасающегося с комплексом Arp2 / 3. Это достигается путем интегрирования распределений c _k ( s ), полученных в результате эксперимента по скорости седиментации с множеством сигналов (рис.1 A и рис. S1 B и C в приложении SI ) (30, 31). В присутствии избытка VCA * две VCA ко-седиментируются с каждым комплексом Arp2 / 3 (Fig. 1 A ). Сходные результаты были получены при различных условиях (таблица S1 в приложении SI, приложение ), что указывает на наличие двух сайтов связывания для VCA в комплексе Arp2 / 3.
Рис. 1.
Две VCA связывают комплекс Arp2 / 3 в разных сайтах. Аналитические эксперименты по ультрацентрифугированию скорости осаждения 0.54 мкМ комплекса Arp2 / 3 в 9,9 мкМ VCA * (см. Рис. S1 A в приложении SI ) собирали с использованием поглощения при 496 нм и интерференционных сигналов. См. Рис. S1 B и C в приложении SI для получения данных по седиментации и посадок. ( A ) Эти два сигнала использовались для определения распределений c _k ( s ) для комплекса VCA * и Arp2 / 3. Заштрихованные области объединены, чтобы найти количество Arp2 / 3 и VCA *, которые смешиваются (указано на панели).Сводку наблюдаемых стехиометрий см. В Таблице S1 в SI Приложение . ( B ) Наблюдаемое отношение связанного VCA * к комплексу Arp2 / 3 при добавлении указанных концентраций домена NtA кортактина. A и B адаптированы с разрешения исх. 31.
NtA-домен кортактина, лиганда комплекса Arp2 / 3, не относящегося к семейству WASP, конкурирует с димерами VCA за связывание с комплексом Arp2 / 3 (22, 29). В присутствии конкурента NtA соотношение VCA * -Arp2 / 3 в экспериментах по центрифугированию упало с 2-1 до очевидного значения насыщения, равного одному VCA * на комплекс Arp2 / 3 (рис.1 В ) (31). Этот результат согласуется с двумя различными сайтами связывания: в одном конкурируют NtA и VCA, а во втором VCA связывается с более высоким сродством, чем NtA (29). Конкуренция NtA за один из двух сайтов связывания VCA также согласуется с предыдущими данными о перекрестном связывании (22).
Затем мы спросили, могут ли оба сайта связывания вмещать VCA, связанный с мономерами актина. Для этого мы использовали SVAUC для количественной оценки количества VCA-актина, сопряженного с комплексом Arp2 / 3. В присутствии избытка VCA-актина, но не только актина (с латрункулином B для предотвращения полимеризации актина), весь комплекс Arp2 / 3 осаждается быстрее, чем свободный или связанный с VCA комплекс Arp2 / 3 (рис.2 A и B ). Таким образом, актин связывается с комплексом Arp2 / 3 VCA-зависимым образом. В этих условиях виды, которые содержат комплекс Arp2 / 3, осаждаются быстрее, чем виды, которые его не содержат. Интегрирование сигналов в медленно (<7 S) и быстро (> 7 S) седиментационных пиках позволило нам определить, что примерно два VCA-актина, ко-седиментированные с комплексом Arp2 / 3 (см. Рис. 2 C и Дополнительные материалы и методы) в приложении SI ).Т.о., обе VCA, ассоциированные с комплексом Arp2 / 3, могут вмещать актин (Fig. 2 C ). В дополнение к этим прямым измерениям стехиометрии мы также определили массы этих видов, используя данные SVAUC, полученные на более медленной скорости (рис. S2 A в приложении SI ). Аналогичная смесь VCA-актина (плюс латрункулин B) и комплекса Arp2 / 3 дала кажущуюся массу 333 кДа (фиг. S2 A и B в приложении SI ). Этот результат согласуется с массой, предсказанной для двух актинов и двух VCA, связанных с одним комплексом Arp2 / 3 (324 кДа), и отличается от масс, полученных для всех бинарных смесей (рис.S2 B в приложении SI ). Таким образом, как стехиометрия, так и измерения массы указывают на сборку VCA ₂ актин ₂ Arp2 / 3.
Рис. 2.
Два актина доставляются двумя VCA в комплекс Arp2 / 3. Аналитические эксперименты по ультрацентрифугированию скорости седиментации с комплексом Arp2 / 3, N-WASP VCA (только вторая V-область) и актином. ( A и B ) c ( s ) распределения были получены для указанных комбинаций материалов.Данные собирали при 50 000 об / мин. При оценке стехиометрии актина использовались интегральные интенсивности сигналов для пиков при 3,8 с в «VCA + Actin» и «Arp2 / 3 + актин + VCA», при 9,2 с в «Arp2 / 3» и 11,4 с в «Arp2 / 3». + Актин + VCA ». «Arp2 / 3» и «Arp2 / 3 отдельно» в A и B — это одни и те же данные. ( C ) Расчеты для определения стехиометрии. Сигналы получены путем объединения данных, показанных в A и B . См. Также рис. S2 в приложении SI для определения стехиометрии посредством оценки молекулярной массы сборки VCA-actin-Arp2 / 3.
Идентификация сайтов связывания VCA на комплексе Arp2 / 3.
Предыдущие исследования показали, что VCA может быть перекрестно связан с Arp3, Arp2, ArpC1 и ArpC3 (21⇓⇓⇓ – 25). Здесь мы разделяем эти контакты на два различных сайта связывания VCA и идентифицируем области VCA, которые перекрестно связываются с отдельными субъединицами Arp2 / 3 в каждом сайте. Чтобы получить эту уточненную информацию о связывании VCA: Arp2 / 3, мы использовали два разных подхода для введения меченых агентов в определенные места в VCA.
Сначала мы соединили фотоактивируемый агент переноса биотиновой метки с отдельными остатками цистеина, введенными мутагенезом в пептиды CA.После фотоактивации этот реагент может переносить биотин на субъединицы комплекса Arp2 / 3 в пределах примерно 17 Å донорного цистеина (рис. 3 A и рис. S3 A и C в приложении SI ). Соседние субъединицы затем можно идентифицировать с помощью зондирующих блотов образцов с разрешением SDS / PAGE на биотинилированные виды. Качественные оценки (рис. S3 B в приложении SI ) относительной интенсивности мечения для доноров N-WASP CA A462C, E473C, A481C, D486C, E491C, E498C приведены на рис.3 В . Как правило, Arp3 метится из сайтов в регионах C и A. Arp2 метится от сайтов на N-конце области C до начала кислой области. И ArpC1, и ArpC3 метят с сайтов на С-конце области А. Мечение ArpC3 было идентифицировано с использованием небольшого сдвига подвижности, выявленного при вестерн-блоттинге анти-ArpC3 (фиг. S3 D и E в приложении SI ). Субъединицы ArpC2, ArpC4 и ArpC5 не были помечены никакими позициями в СА.Аналогичные результаты были получены с аналогичными мутантами цистеина в N-WASP VCA (фиг. S3 C в приложении SI ) и VCA WAVE1 (фиг. S3 D и E в приложении SI ).
Рис. 3.
Перенос метки от КА к комплексу Arp2 / 3. ( A ) Доноры переноса меток Arp2 / 3, E491C и E498C N-WASP CA смешивали, как показано, и освещали. Где указано, домен NtA кортактина был добавлен в качестве конкурента. Биотинилированные субъединицы Arp2 / 3 визуализировали с использованием нейтравидин-HRP и идентифицировали путем сравнения с блотом, окрашенным Memcode Blue (дорожка, отмеченная MB).Неспецифическая перекрестная реакция с ArpC3 обозначена «нс». Перенос метки в ArpC3 приводит к сдвигу мобильности, см. Рис. S3 D и E в приложении SI . ( B ) Перенос метки от мутантов N-WASP CA (перечисленных под последовательностью CA) оценивали качественно по интенсивности биотинилированной полосы (см. Фиг. S3 B в приложении SI ). Изменения, зависимые от Cortactin NtA, показаны справа. Мечение ArpC2, ArpC4 или ArpC5 не наблюдалось.( C ) Эксперименты по переносу метки с использованием Cys-NtA и NtA-Cys в качестве доноров. «MB» и «ns», как описано в A . ( D ) N-WASP CA, где W503 был заменен на BPa, смешивали с комплексом Arp2 / 3 и освещали, когда указано. Окрашивание продуктов кумасси бриллиантовым синим, новые полосы отмечены звездочкой. ( E ) Сшивающие продукты из D идентифицируют с помощью блоттинга. Дорожка 1, маркеры молекулярной массы. Дорожки 2, 4 и 6 представляют собой смесь CA и Arp2 / 3 после освещения.Дорожки 3 и 5 представляют собой только Arp2 / 3. Дорожку 2 исследовали на наличие биотинилированных белков (как в A ). Дорожки 3 и 4 зондировали на Arp3 (с использованием антитела против Arp3). Дорожки 5 и 6 зондировали на ArpC1 (с использованием антитела против ArpC1B).
Поразительно, что C-концевые остатки кислой области находятся в пределах диапазона как ArpC3, так и ArpC1. Эти субъединицы подходят друг к другу не ближе, чем приблизительно 50 Å в структуре ингибированного комплекса Arp2 / 3, расстояние намного больше, чем диапазон 17 Å сшивающего агента.Учитывая эту геометрию и стехиометрию VCA ₂ ∶Arp2 / 3, определенную выше, вполне вероятно, что ArpC1 и ArpC3 распознаются разными СА-пептидами.
Чтобы лучше разграничить два сайта связывания, мы использовали способность кортактина NtA конкурировать с VCA только на одном сайте (рис. 1 B ). Классификация переноса метки в соответствии с ее направлением изменения при добавлении 25 мкМ NtA (уменьшение по сравнению с увеличением или без изменений) дала две группы субъединиц (фиг. 3 A и B ).После добавления NtA мечение Arp3 и ArpC3 снижалось, в то время как мечение Arp2 и ArpC1 увеличивалось или оставалось постоянным. Субъединицы, показывающие снижение сигнала при добавлении NtA, аналогичны тем, которые помечены NtA: Arp3, ArpC3 и ArpC2 (последние две лишь слабо помечены) (рис. 3 C ). Таким образом, группы Arp3 / ArpC3 и Arp2 / ArpC1, вероятно, представляют два сайта связывания VCA в комплексе Arp2 / 3.
Используемый здесь реагент переноса метки имеет относительно большой диапазон для донорства и, таким образом, сообщает как о непосредственно контактирующих, так и о проксимальных субъединицах комплекса Arp2 / 3.Чтобы ограничить модификацию первого, мы синтезировали новый пептид N-WASP CA, в котором триптофан (W503) возле С-конца был заменен бензоил-фенилаланином (BPa), а биотин был добавлен на N-конце для обнаружения. BPa представляет собой фотоактивируемый сшивающий агент короткого действия (<5 Å ), который по размеру и гидрофобности аналогичен триптофану (32). Когда этот пептид CA связывается с комплексом Arp2 / 3 и освещается, примерно 40% полос Arp3 и ArpC1 смещаются в сторону более высокомолекулярных видов (рис.3 D ), которые биотинилированы и содержат иммунореактивность Arp3 или ArpC1 (фиг. 3 E ). Таким образом, BPa находится в пределах 5 Å от Arp3 и ArpC1, что убедительно указывает на то, что непосредственный С-конец VCA напрямую контактирует с этими субъединицами. Поскольку наибольшее сближение Arp3 и ArpC1 в ингибированной конформации составляет> 25 Å , эти две перекрестные связи д. Происходить из разных сайтов связывания в комплексе Arp2 / 3.
Отдельные функции для двух сайтов связывания VCA.
Предыдущие мутагенные анализы мономерных димеров VCA или GST VCA показали различные роли областей V, C и A в активации.Однако в этой предыдущей работе не удалось определить, требуется ли область VCA на одном или обоих сайтах. Чтобы отличить это, мы ковалентно соединили пептиды VCA WASP на их N-концах, что позволило получить как гомодимеры VCA (VCA – VCA), так и гетеродимеры, в которых один VCA был дикого типа, а второй имел V или C, замененные на равную длину (GGS). _n линкер или отсутствует A (VCA – xCA, VCA – VxA и VCA – VC, рис. 4 A и рис. S4 A — C в приложении SI ).
Рис. 4.
Активация комплекса Arp2 / 3 делециями VCA – VCA. ( A ) Мультяшное изображение материалов VCA – VCA. VCA от человеческого WASP. ( B ) Скорости полимеризации актина, обнаруженные в анализах зависимой полимеризации актина от Arp2 / 3 с указанными концентрациями материалов VCA, описанными в A . ( C ) Скорости полимеризации актина, обнаруженные в анализах зависимой полимеризации актина от Arp2 / 3 с димерами VCA с N-концевыми линкерами разной длины.Горизонтальная пунктирная линия — активность нестимулированного Arp2 / 3. Анализы активности выполняли с 10 нМ Arp2 / 3, 4 мкМ актина (меченый 5% пиреном) в KMEI150, и в среднем от трех до шести повторов. Планки погрешностей представляют собой стандартную ошибку 1σ для среднего значения, и во многих случаях они меньше символа. См. Также рис. S4 в приложении SI к стандарту для подробностей последовательности димера VCA, измерений сродства материалов в A к Arp2 / 3 и для титрования вариантов N-концевого линкера.
Все три области необходимы в обоих сайтах для высокого сродства и / или максимальной активации комплекса Arp2 / 3. VCA – VCA вызывает устойчивую активацию при низких концентрациях и насыщается при концентрациях около 400 нМ (рис. 4 B ). Мономер VCA имел примерно такую же насыщающую активность, как VCA – VCA, но приближался к насыщению с сигмоидальной формой и насыщался примерно при 3000 нМ, что отражает его более низкое общее сродство (Рис. S4 H в SI Приложение ; см. Также ссылку.29). Делеции C или A (VCA – VxA и VCA – VC) обладают эффективностью между мономером VCA и VCA – VCA, их активности достигают насыщения примерно при 1500 нМ (рис. 4 B ). VCA – VxA обладает насыщающей активностью, близкой к активности VCA – VCA, а VCA – VC имеет насыщающую активность несколько выше, чем VCA – VCA. В настоящее время нам не известна более высокая максимальная активность последнего. Эффекты V-делеции (VCA – xCA) различны. Подобно VCA – VCA, VCA – xCA обладает активностью, которая насыщает при низких концентрациях (примерно 200 нМ) и имеет высокое сродство к комплексу Arp2 / 3 (рис.S4 G и H в приложении SI ). Однако насыщающая активность VCA – xCA очень низкая (рис. 4 B ). Таким образом, комплекс Arp2 / 3 связан с высоким сродством, но отсутствие второй V-области приводит к очень слабой активности нуклеации. Это указывает на то, что активация комплекса Arp2 / 3 может потребовать доставки двух мономеров актина, а не одного, как обычно предполагалось.
Мы также сконструировали димеры VCA с серией N-концевых линкеров, чтобы спросить, влияет ли длина линкера на активность по отношению к комплексу Arp2 / 3 (рис.S4 D и E в приложении SI ). Мы сравнили активность как функцию концентрации для трех из этих материалов: самого короткого, самого длинного и одного промежуточного (рис. S4 F в приложении SI ). Каждый подходил к насыщающей деятельности одинаково; для всех трех материалов 300 нМ димера VCA лишь немного менее активны, чем 600 нМ димера VCA. Однако эти три материала обладали разной насыщающей активностью. Поскольку они включали самые короткие и самые длинные линкеры, мы пришли к выводу, что длина линкера не сильно влияет на подход к насыщающей активности, и при 400 нМ все конструкции близки к своей насыщающей активности.Мы измерили активность при 400 нМ для семи линкеров различной длины (рис. 4 C ). Было обнаружено, что для N-концевых линкеров короче, чем приблизительно 70 Å , активность при 400 нМ была примерно такой, как наблюдали для VCA-xCA (рис. 4 B и C ). Когда длина линкера превышала это значение, резко возрастала активность при 400 нМ. Такое поведение обеспечивает шкалу длины для разделения двух V-областей при активации комплекса Arp2 / 3.
Чтобы определить, какой из двух сайтов связывания отвечает на отсутствующую V-область, мы разработали средства их отдельного зондирования.С этой целью мы генетически слили две VCA в единый полипептид через линкер (GGS) ₄ (VCAggsVCA, фиг. 5 A и фиг. S5 A в приложении SI ). VCAggsVCA имеет сродство и активность по отношению к комплексу Arp2 / 3, которые являются промежуточными между таковыми мономера VCA и связанного на N-конце VCA-VCA (фиг. 5 C и фиг. S4 H в приложении SI ). При насыщении его активность ниже, чем у двух других реагентов. Более низкая насыщающая активность и промежуточная аффинность указывают на то, что оба VCA из VCAggsVCA взаимодействуют с комплексом Arp2 / 3 одновременно.То есть, если два пептида VCAggsVCA связывают Arp2 / 3 с одним VCA каждый, тандемный материал будет вести себя как мономер VCA с низким сродством, но с полной активностью при насыщении. То, что это не так, указывает на то, что тандемный VCA связывается с обоими задействованными VCA.
Рис. 5.
Асимметричное включение комплекса Arp2 / 3 посредством VCAggsVCA. ( A ) Мультяшное изображение полученных конструкций VCAggsVCA. Материалы VCAggsVCA были получены с h572C (нативные порядковые номера WASP) либо в N-концевой (верхняя строка), либо в C-концевой (вторая строка) VCA.Удаление N-концевой или C-концевой V-области приводит к материалам CAggsVCA и VCAggsxCA соответственно. ( B ) Эксперименты по переносу меток с мутантных материалов VCAggsVCA h572C на Arp2 / 3 в отсутствие или в присутствии актина. ( C ) Скорости полимеризации актина в анализах зависимой полимеризации актина от Arp2 / 3, стимулированных указанными материалами VCA, 10 нМ Arp2 / 3 и 4 мкМ актина (меченый 5% пиреном) в KMEI150, и составляют в среднем от трех до шести повторяется. Планки погрешностей представляют собой стандартную ошибку 1σ для среднего значения, и во многих случаях они меньше символа.См. Также рис. S5 в приложении SI для информации об активности VCAggsVxA и VxAggsVCA и последовательности VCAggsVCA.
Поместив цистеин в N- или C-концевую область C по отдельности (рис. 5 A ), мы повторили перенос метки с VCAggsVCA в качестве донора. В отсутствие актина эти реакции обнаруживают небольшую асимметрию, при этом каждая C область метит Arp3 сходным образом (Fig. 5 B ). Однако, когда реакции повторяли в присутствии избытка латрункулина B: актина, две тандемные конструкции VCA вели себя по-разному (рис.5 В ). N-концевой VCA предпочтительно помечен Arp2 и ArpC1, тогда как C-концевой VCA предпочитает Arp3. Предпочтение не является полным, но результат, тем не менее, предполагает, что VCAggsVCA связывает комплекс Arp2 / 3 в предпочтительной ориентации, при этом N-концевой VCA занимает сайт Arp2, а C-концевой VCA занимает сайт Arp3. Эта асимметрия позволяет исследовать два сайта независимо друг от друга.
Чтобы определить, куда должен быть доставлен актин, мы создали один тандем без N-концевой V-области (CAggsVCA) и второй, в котором C-концевую V-область заменили последовательностью GGS равной длины (VCAggsxCA) (рис.5 А ). VCAggsxCA, который не может доставлять актин к Arp3, насыщается при значительно более низкой активности, чем тандем дикого типа (фиг. 5 C ). CAggsVCA, который не может доставлять актин к Arp2, приближается к насыщению медленнее, чем конструкция дикого типа, и также может иметь более низкую насыщающую активность. Объединенные данные перекрестного сшивания и мутагенеза тандемного димера VCAggsVCA подтверждают, что доставка актина к Arp3 критична для активации комплекса Arp2 / 3, и что доставка к Arp2 также играет важную, но второстепенную роль в этом процессе.
Обсуждение
Представленных здесь данных в сочетании с существующими литературными данными достаточно, чтобы предложить модель для двух сайтов связывания VCA в комплексе Arp2 / 3. В других исследованиях для создания моделей того, как VCA связывает комплекс Arp2 / 3 (см. таблицу S2 в приложении SI ). Кроме того, консервативные поверхности комплекса Arp2 / 3 (28), структуры V-области, связанные с актином (10, 15), и сходство последовательностей C- и V-областей (9, 10) информируют при построении нашей модели.Наконец, связывания пептида CA достаточно, чтобы вызвать конформационное изменение в комплексе Arp2 / 3 (9, 12, 14), и при реконструкции ветви Arp2 и Arp3 принимают конформацию, подобную димеру актина с коротким шагом (6 ). Ниже мы собираем эти данные в модель промежуточного соединения нуклеации комплекса Arp2 / 3, связанного с VCA.
Два сайта связывания VCA на комплексе Arp2 / 3.
Наши данные о перекрестном связывании с BPa и переносе биотиновой метки показывают, что есть два различных сайта связывания VCA в комплексе Arp2 / 3.Реакция экспериментов по переносу метки на конкуренцию NtA показывает, что один сайт находится рядом с Arp2 и ArpC1, а другой — рядом с Arp3 и ArpC3 (Fig. 3 B ). Мы называем эти два сайта сайтами Arp2 и Arp3, соответственно, чтобы подчеркнуть субъединицу, к которой мономер актина, вероятно, доставляется соответствующими V-областями (см. Ниже).
Для создания модели взаимодействия сайтов VCA-Arp3 (Fig. 6 A ) мы начали с наблюдения, что замена C-концевого W503 на BPa обеспечивает эффективное перекрестное связывание с Arp3.Кроме того, биотин может переноситься из цистеина рядом с концом C N-WASP, E498C (рис. 3) или C-концом WAVE1 (рис. S3 в приложении SI, приложение ) как к Arp3, так и к ArpC3. Таким образом, мы располагаем C-концевой элемент Acidic / Trp на Arp3, но в пределах 17 Å от ArpC3. Это расположение согласуется с предыдущим наблюдением, что спиновая метка на N-WASP CA C506 уширяет сигналы ЯМР в ArpC3 (диапазон <25 Å ) (21). Консервативный основной участок (идентифицированный в ссылке 28 и названный A-1) служит вероятным сайтом связывания для этого высококислотного элемента.В соответствии с этим расположением, W503 связывается в этом сайте в недавней кристаллической структуре A-области, связанной с комплексом Arp2 / 3 (34).
Рис. 6.
Предлагаемые сайты связывания для VCA на комплексе Arp2 / 3. Структурные модели сайтов связывания VCA на Arp2 / 3. Модели построены, как описано в тексте, с использованием информации, приведенной в Таблице S2 в Приложении SI . ( A — C ) Карикатура, изображающая ориентацию связывания СА, показанная толстыми черными линиями, наверху ингибированного комплекса Arp2 / 3, показанного на изображении поверхности.Субъединицы имеют следующие цвета: Arp3-оранжевый, Arp2-красный, ArpC1-зеленый, ArpC2-голубой, ArpC3-пурпурный, ArpC4-синий и ArpC5-желтый. Консервированные участки (28) обозначаются изменением цвета поверхности. C-2 (на Arp2) и A-2 (на Arp3) обозначены черной поверхностью. Консервативные основные остатки M-3 (на ArpC1) и A-1 (на Arp3) показаны синим, высококонсервативные, небазовые остатки M-3 показаны на белой поверхности. ( A ) Предлагаемый сайт связывания Arp3. ( B ) Эталонная ориентация Arp2 / 3 с помеченными субъединицами.( C ) Предлагаемый сайт связывания Arp2 / ArpC1. ( D ) Доставка актина к Arp2 / 3 в длинношаговой ориентации димера относительно Arp3 приводит к большому стерическому конфликту с Arp2. ( E ) Модель комплекса Arp2 / 3 с Arp2 перемещается в положение димера актина с коротким шагом по отношению к Arp3. ( F ) Модель Arp2 / 3, связанного с двумя пептидами VCA и двумя актинами. Мономеры актина были добавлены в длинных позициях относительно Arp2 и Arp3. Стрелки указывают вращение молекул относительно эталонного вида комплекса Arp2 / 3 на панели B .Панели E и F имеют одинаковую ориентацию.
Эксперименты по переносу метки предполагают, что вся длина CA связывается с Arp3 или рядом с ним (рис. 3 B ), что согласуется с предыдущим перекрестным связыванием положения 462 (N-конец области C) с этой субъединицей (21 ). Из-за сходства последовательностей между C- и V-областями ранее было высказано предположение, что C-область может контактировать с субъединицами комплекса Arp2 / 3 способом, аналогичным V-области: комплексу актина (9, 10, 15).По этой аналогии остатки 466–476 области C д. Формировать спираль, которая удваивается вдоль обратной стороны Arp3, контактируя с консервативным участком (идентифицированным в ссылке 28 и обозначенным A-2). Такое размещение согласуется с экспериментами со спиновой меткой ЯМР, показывающими, что остаток 481 (C-конец области C) находится в пределах 25 Å от ArpC3, но остаток 462 N-WASP находится за пределами этого диапазона (21). Более того, он будет располагать V-регион на зазубренном конце Arp3, позволяя ему доставлять актин в ориентации с длинным шагом.
Мы моделируем VCA на сайте Arp2, используя аналогичную логику (рис. 6 C ). Во-первых, наши данные сшивания W503BPa показывают, что ближайший C-конец VCA связан с ArpC1 (Fig. 3 E ). Это расположение согласуется с переносом биотина от донора E498C (Fig. 3 B ) и предыдущей демонстрацией того, что VCA может связывать изолированный ArpC1 способом, зависящим от консервативного C-концевого остатка триптофана (26). Учитывая очень кислую природу области A, наиболее вероятным сайтом связывания является консервативный основной участок рядом с интерфейсом ArpC1 / Arp2 (M-3 в исх.28). Взаимодействие с этим сайтом д. Объяснить перенос биотина на ArpC1 по всей области A (Fig. 3 B ). Близость этого основного патча к ArpC5 может также объяснить сообщаемое перекрестное связывание N-WASP VCA с этой субъединицей комплекса acanthamoeba Arp2 / 3 (25). Кроме того, нарушение связывающей поверхности кислой области может также объяснить летальный фенотип аллеля Arc40-143 у почкующихся дрожжей, когда эта поверхность мутирована (35).
Как и в сайте Arp3, мы помещаем область C на Arp2 в виде спирали, имитирующей взаимодействие области V с актином (9, 10, 15, 36).Это приводит к контакту области C с консервативным участком (обозначенным C-2 в ссылке 28). Это расположение также позиционирует C-конец спирали в контакте с участком M-3 (28) на ArpC1, возможно, объясняя сообщение о том, что изолированный пептид C-спирали может связываться с этой субъединицей (24). В этой ориентации E473 и A481 достаточно близки к ArpC1, чтобы обеспечить перенос метки, но, как мы наблюдаем, A462 находится вне диапазона (рис. 3 B ). Такая организация C-спирали д. Позиционировать V-область для доставки мономера актина к Arp2 (9, 10).Другие также предложили этот сайт связывания для C-спирали, но затем поместили кислую область, выступающую в сторону Arp3, а не ArpC1, чтобы удовлетворить данным сшивания Arp3 с использованием одного VCA (9, 10). Наша модель удовлетворяет этим данным с двумя различными пептидами VCA.
A Модель для Arp2 / 3∶VCA
₂ ∶Actin ₂ Сборка.
Простейшее объяснение более высокой активности димеров VCA по сравнению с мономерами в активации комплекса Arp2 / 3 состоит в том, что две VCA связывают сайты Arp2 и Arp3 одновременно в какой-то момент во время процесса нуклеации.Кроме того, наши данные ультрацентрифугирования показывают, что два мономера VCA могут привлекать два мономера актина в комплекс Arp2 / 3. Чтобы построить модель этого комплекса Arp2 / 3 VCA ₂ actin ₂, мы начали с того, что отметили значительное стерическое столкновение между Arp2 и актином, доставленным на зазубренный конец Arp3 в ингибированной структуре Arp2 / 3. сложный (рис.6 D ). Это столкновение будет устранено вращением Arp2, чтобы создать димер псевдоактина с коротким шагом с Arp3 (Fig. 6 E ), что согласуется с электронно-микроскопическими реконструкциями соединения ветвей филаментов (6).Добавление мономеров актина в длинношаговой ориентации к зазубренным концам Arp2 и Arp3, V-областей на основе их известных комплексов с актином и двух описанных выше взаимодействий CA приводит к модели для Arp2 / 3∶VCA ₂ ∶ actin ₂ сборки (рис.6 F ).
В этой модели N-концы двух V-областей разнесены приблизительно на 65 Å , что позволяет соединять их мостиком с помощью N-концевого линкера VCA-VCA (который может охватывать приблизительно 150 Å в расширенной конформации).Уменьшение линкера до 80 Å или менее приводило к потере активности (фиг. 4 C ). Это хорошо согласуется с разделением V-регионов в нашей модели, учитывая, что оба мономера актина частично блокируют прямой путь и что существуют энтропийные штрафы за полное удлинение любого неупорядоченного линкера (37). Предположительно, когда N-концевой линкер слишком короткий, одна V-область возвращается к линкерной функции, превращая молекулу в аналог VCA-xCA. Это могло бы объяснить низкую активность, наблюдаемую при более коротких длинах линкеров.
При рассмотрении того, как VCAggsVCA может связывать комплекс Arp2 / 3, есть два потенциальных соединения от конца C одного VCA до N-конца другого. В нашей модели (Рис. 6 F ), C-конец связанной с Arp2 VCA находится примерно на 60 Å от N-конца связанной с Arp3 VCA. Для противоположного соединения, C-конец связанного с Arp3 VCA находится примерно на 110 Å от N-конца связанного с Arp2 VCA и должен существенно отклоняться от прямолинейного пути, чтобы избежать как актинов, так и Arp3.Линкер из 22 остатков в VCAggsVCA может охватывать только первое расстояние (фиг. S5 A в SI, приложение ). Таким образом, N- и C-концевые VCA должны связываться с сайтами Arp2 и Arp3, соответственно, в соответствии с нашими данными переноса меток (Fig. 5 B ). Тот факт, что VCAggsVCA связывается и активируется, и делает это с предпочтениями предсказанных сайтов связывания, служит важным тестом нашей модели.
Последствия для активации комплекса Arp2 / 3.
Какую роль играют два VCA (рис.1) и два актина (рис. 2) служат для активации комплекса Arp2 / 3? Повышенная активность димеров VCA предполагает, что обе VCA вносят вклад в этот процесс. Тандемные эксперименты с VCA показывают, что V регионы (и, следовательно, актины) играют разные роли. С-концевая V-область, нацеленная на Arp3, более важна для активации, поскольку ее делеция приводит примерно к 75% снижению максимальной активности (фиг. 5 C ). Учитывая, что асимметрия этих материалов находится в этом порядке, потеря V-области, нацеленной на Arp3, может отражать полную инактивацию материала, когда актин не может быть доставлен в Arp3.Напротив, делеция N-концевой V-области, нацеленной на Arp2, приводит лишь к небольшой потере активации (приблизительно 30%). Большая важность доставки актина к Arp3 согласуется с наблюдением, что комплекс Arp2 / 3, содержащий слияние области Arp2-V, может быть активирован GST-CA (12), поскольку проверка структуры предполагает, что введенная область V может доставлять актин к Arp3 примерно так же, как и к Arp2.
Очень низкая активность VCA-xCA (приблизительно 25% от VCA-VCA) кажется несовместимой с первостепенной важностью доставки актина только в один сайт.Если VCA-xCA связывает комплекс Arp2 / 3 одинаково в двух возможных ориентациях, его активность должна быть примерно 50% от активности VCA-VCA. То, что активность составляет ≥50%, предполагает, что предпочтительна менее активная ориентация с VCA: actin на сайте Arp2. Это можно объяснить, если V: actin вносит более значительный вклад в сродство в сайте Arp2, чем в сайте Arp3. Другими словами, VCA: actin связывается более плотно, чем CA с сайтом Arp2, но не с сайтом Arp3. Это различие согласуется с конфликтом в неактивном комплексе Arp2 / 3 между Arp2 и актином, связанным с Arp3 (рис.6 D ), что предполагает, что в отсутствие реаранжировки Arp2 VCA: актин должен связываться со сродством, аналогичным только CA. Связывание VCA-xCA затем будет смещено в сторону ориентации, которая доставляет актин к Arp2, что приводит к неактивному комплексу Arp2 / 3. Аналогичный аргумент может быть использован для объяснения примерно 90% активности VCA – VxA (см. Рис. 4 B и рис. S5 B в приложении SI ). Если CA вносит одинаковый вклад в оба сайта, этот аргумент будет означать, что VCA: actin более плотно связывается с сайтом Arp2, чем с сайтом Arp3.Это согласуется с опубликованными данными SAXS, показывающими предпочтительную ассоциацию одного VCA: актина с сайтом Arp2 при смешивании в соотношении 1-1 VCA: актин к комплексу Arp2 / 3 (9) (в отличие от нашего исследования, где мы использовали избыток VCA: актин, рис. 2).
В то время как V-область явно необходима для доставки исходных актинов в комплекс Arp2 / 3, было обнаружено, что связывание CA (или VCA в отсутствие актина) вызывает конформационные изменения в сборке, как показано FRET ( 12) и электронной микроскопии (13, 14).В этих исследованиях использовалась смесь мономерных и димерных областей СА, так что важность связывания СА на любом сайте трудно различить. Однако модель SAXS для VCA: актин, связанный с сайтом Arp2, предполагает, что вовлечение только сайта Arp2 может быть достаточным, чтобы вызвать конформационные изменения. Наиболее вероятно, что активирующее конформационное изменение термодинамически благоприятствует совместной доставке актина к Arp3 и эффектам связывания CA. Остается неясным, как эти события и связывание филаментов кинетически упорядочиваются во время процесса нуклеации.
Заключение
Предыдущие механизмы нуклеации Arp2 / 3 задействовали только одно связывание VCA и единственный актин, доставленный для создания ядра. Наша модель утверждает, что доставка актина к Arp2 происходит с высоким сродством, но активирует комплекс Arp2 / 3 лишь слабо, тогда как доставка актина к Arp3 происходит с низким сродством, но является критическим для активности. Это предполагает, что зародышеобразование в основном происходит через два VCA и два актина, даже если они представлены в виде мономеров. Как утверждается ниже, в биологическом контексте белки WASP, вероятно, функционируют как димеры и олигомеры более высокого порядка.В таких системах участие сайта Arp2 с высоким сродством должно стимулировать взаимодействие с сайтом с низким сродством Arp3.
Мы предполагаем, что в какой-то момент процесса зародышеобразования, даже при индуцировании мономерами VCA, вероятно, существует сборка комплекса VCA ₂ actin ₂ ∶Arp2 / 3, описанная выше. Как это вписывается в путь зародышеобразования? Наиболее вероятная возможность состоит в том, что эта сборка с выровненными Arp2 и Arp3 образуется в растворе до связывания филаментов.Такой комплекс имеет два актина в дополнение к субъединицам Arp2 и Arp3 и, таким образом, может функционировать как ядро. Интересная возможность состоит в том, что это ядро Arp2-Arp3-actin ₂ может каким-то образом предотвращаться от роста за счет ассоциации с VCA, возможно, подобно тому, как VCA предотвращает спонтанное зарождение актина (20). Это ингибирование может быть снято либо колебаниями VCA на формирующемся зазубренном конце, либо в ответ на специфический сигнал — например, связывание материнского филамента или гидролиз АТФ в Arp2 или актине.Альтернативная возможность состоит в том, что комплекс Arp2 / 3 сначала связывает материнскую филамент, и стехиометрия 2∶2∶1 собирается непосредственно на филаменте. В этом случае материнская филамент также может вносить вклад в выравнивание Arp2 и Arp3. Любая возможность позволит координировать различные события связывания и зародышеобразования, так что образование ответвлений происходит с высокой точностью.
В клетках белки WASP интегрируют широкий спектр сигналов для управления Arp2 / 3-опосредованной динамикой актина. Эти сигналы включают мембранные фосфоинозитиды, мультивалентные белки Sh4 и градиенты Rho GTPase, которые коллективно группируют белки WASP на мембране (7).Это наблюдение имеет несколько интересных выводов. Во-первых, димеры VCA, вероятно, являются функциональной формой белков WASP в клетках, усиливая биохимический механизм, в котором два VCA действуют вместе, способствуя нуклеации. Во-вторых, он обеспечивает механизм организации сети разветвленных филаментов, потому что Arp2 / 3, задействованный в двух точках, может смещать ориентацию дочернего филамента по направлению к мембране (где N-концы белка WASP взаимодействуют с активирующими факторами). Наконец, клеточные механизмы интеграции сигналов WASP, по-видимому, совпадают с молекулярным механизмом активации Arp2 / 3, что демонстрирует способность разных организационных масштабов влиять друг на друга.Мы надеемся, что это механистическое понимание функции Arp2 / 3 послужит движущей силой как для будущих биохимических, так и для биологических исследований динамики актина.
Материалы и методы
Приготовление белка.
Актин, пиренактин и комплекс Arp2 / 3 получали, как описано ранее (20, 38, 39). Актин хранили в G-буфере (2 мМ Трис HCl, 200 мкМ АТФ, 1 мМ азид натрия, 0,5 мМ DTT, 100 мкМ хлорид кальция) до двух месяцев; Комплекс Arp2 / 3 хранили в KMEI (10 мМ имидазола, pH 7.0, 50 мМ KCl, 1 мМ MgCl (₂, 1 мМ EGTA) + 0,5 мМ DTT и используются в течение трех недель после приготовления или используются из запасов мгновенно замороженных в KMEI + 0,5 мМ DTT, 100 мкМ АТФ и 20% массы к объему сахарозу и хранят при -80 ° C. Остаточная сахароза и АТФ из этих замороженных исходных материалов Arp2 / 3 не оказывают заметного влияния на анализы и согласуются с любыми сравниваемыми данными. Перед использованием в экспериментах, требующих условий невосстановления, комплекс Arp2 / 3 концентрировали и заменяли буфер (Superdex200, GE) на KMEI без DTT, а актин диализовали против G-буфера без DTT.
Материалы, производные от N-WASP VCA, N-WASP CA, WASP VCA и кортактина NtA, получали, как описано ранее, или с небольшими изменениями (29). Подготовка WASP VCAggsVCA была адаптирована из метода для WASP VCA. Ковалентные гетеродимеры VCA были получены аналогично N-WASP N-концевому соединению VCA, но для выделения чистых гетеродимеров потребовались методы ионного обмена, разработанные для каждого материала (см. SI, приложение ). Мечение цистеина с помощью Alexa Fluor 488 C ₅ малеимида (Invitrogen) или реагента для переноса метки (Profound Mts-ATF-Biotin, Pierce) выполняли в течение двух часов при комнатной температуре в соответствии с рекомендациями производителя.
Анализ сборки актина.
Анализы сборки актина проводили, как описано ранее (38), но с тремя модификациями. Сначала анализы сборки были выполнены в KMEI с концентрацией KCl, доведенной до 150 мМ. Во-вторых, за исключением Фиг. S5 B в SI Приложение (которое было собрано с использованием ранее описанного оборудования), 8 или 16 анализов были выполнены одновременно с использованием планшет-ридера Varioskan Flash (Thermo Scientific). В-третьих, количественное определение было выполнено путем определения скорости полимеризации актина t ₅₀.
Аналитическое ультрацентрифугирование.
Все аналитические эксперименты по ультрацентрифугированию проводились на центрифуге Optima XL-I с использованием ротора An50-Ti (Beckman – Coulter). Образцы (приблизительно 390 мкл) помещали в заполненные углем двухсекторные центральные элементы Epon. Оптические системы поглощения и / или интерференции использовали для контроля осаждения белков при скорости вращения ротора 50 000 об / мин, за исключением экспериментов по измерению массы, которые проводились при 30 000 об / мин.Стехиометрия комплекса Arp2 / 3∶актин∶VCA была рассчитана с использованием методологии «ведущего» и «отстающего», описанной ранее (40). Данные были проанализированы с использованием SEDFIT и SEDPHAT (доступно на http://www.analyticalultracentrifugation.com) (30, 41). Дополнительные подробности доступны в Дополнительные материалы и методы в SI Приложение и в отдельном методическом документе (31).
Сшивка и перенос метки.
Реакции переноса метки VCA, CA и NtA следовали установленным методам (42), но в качестве реагента для переноса метки использовали MTS-ATF-биотин (Pierce), и блоты зондировали с помощью нейтравидин-HRP Pierce.Пептиды, меченные MTS-ATF-биотином (5 мкМ), смешивали с 1 мкМ комплексом Arp2 / 3 в KMEI без восстановителя. Реакции асимметричного сшивания проводили с 2 мкМ комплекса Arp2 / 3, 1,5 мкМ меченого белка VCAggsVCA, 5 мкМ актина и 19 мкМ латрункулина B (Calbiochem, # 428020) в KMEI с добавлением 100 мкМ АТФ.
N-конца биотинилированных пептидов N-WASP CA с W503, измененным на BPa, где BPa представляет собой бензоилфенилаланин (32), были синтезированы с использованием методов FMOC. Для сшивки с комплексом Arp2 / 3 использовался фильтрованный свет от ртутной лампы мощностью 200 Вт.Arp3 и ArpC1 обнаруживали вестерн-блоттингом.
Молекулярное моделирование
Молекулярное моделирование выполнено в Pymol (Delano Scientific) с использованием следующих опубликованных координат: Актин: WASP VCA (15), ингибированный бычий комплекс Arp2 / 3 с полностью построенным Arp2 (27, 28), нитчатый актин (43) . Возможные сайты связывания C-области на Arp2 или Arp3 были обнаружены путем наложения структуры actin: WASP VCA (15) на Arp2 или Arp3, соответственно. Модель Arp2 / 3∶VCA ₂ ∶actin ₂ была создана вращением комплекса Arp2 / 3 для выравнивания Arp3 с первым мономером в тетрамере актина, полученным из координат нитевидного актина.Arp2 был перемещен, чтобы выровнять его со вторым актином, и оставшиеся два актина появляются в модели.
Благодарности
Мы благодарим С.Ти и докторов наук. Крис Юргенсон, Брэд Нолен и Том Поллард за обмен неопубликованными данными и содержательные обсуждения. Эта работа была поддержана Медицинским институтом Говарда Хьюза и грантами Национальных институтов здравоохранения (NIH) (R01-GM56322) и Welch Foundation (I-1544). S.B.P. был поддержан стипендией NIH (1F32-GM06917902).
Сноски
Вклад авторов: S.B.P., C.A.B. и M.K.R. спланированное исследование; S.B.P., L.K.D. и C.A.B. проведенное исследование; S.B.P., C.A.B. и D.S.K. внесены новые реагенты / аналитические инструменты; S.B.P., L.K.D., C.A.B. и M.K.R. проанализированные данные; и S.B.P., C.A.B. и M.K.R. написал газету.
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
* Для этой статьи с прямым представлением был назначен редактор.
См. Резюме автора на странице 13367 (том 108, номер 33).
Эта статья содержит вспомогательную информацию на сайте www.pnas.org/lookup/suppl/doi:10.1073/pnas.1100236108/-/DCSupplemental.
Комплекс GARP необходим для гомеостаза клеточных сфинголипидов
Здесь мы показываем, что ретроградный транспорт, опосредованный комплексом GARP, от эндосом к Гольджи важен для гомеостаза клеточных сфинголипидов. У дрожжей потеря комплекса GARP приводит к снижению уровней сложных сфинголипидов и накоплению промежуточных продуктов синтеза сфинголипидов, в первую очередь, длинноцепочечных оснований.Важно отметить, что это накопление коррелирует с аномальной морфологией и функцией вакуоля, предполагая, что это накопление может быть токсичным. Истощение субъединицы комплекса GARP в клетках млекопитающих приводит к сходным фенотипам. Ретроградный трафик, вероятно, влияет на субклеточную локализацию большого количества белков. Таким образом, примечательно, что многие фенотипы, связанные с дефицитом GARP, значительно ослабляются фармакологическим ингибированием SPT, первой и лимитирующей стадии синтеза сфинголипидов.Вместе эти результаты предполагают, что накопление токсичных липидов может лежать в основе значительной степени клеточной дисфункции из-за генетических дефектов в ретроградном движении и что восстановление баланса сфинголипидов может быть стратегией лечения заболеваний, вызванных этими дефектами.
Наши данные предполагают, что комплекс GARP является критическим для рециркуляции липидов между плазматической мембраной, эндосомами и аппаратом Гольджи. Как в клетках дрожжей, так и в клетках млекопитающих дефицит комплекса GARP нарушает гомеостаз сфинголипидов и стеролов и приводит к накоплению стеринов в эндолизосомной системе.Обычно липиды, извлеченные из плазматической мембраны посредством эндоцитоза, могут быть повторно использованы через ретроградный путь эндосомы к Гольджи для доставки липидов, необходимых для быстрого расширения мембраны во время роста. Однако у мутантов GARP некоторые липиды мембранного происхождения, по-видимому, перенаправляются в вакуоли (или лизосомы) для деградации. Такое изменение маршрута липидов, вероятно, снижает их уровни в плазматической мембране и увеличивает уровни сфинголипидов и продуктов их распада в вакуоли / лизосоме. Это уменьшение мембранных сфинголипидов может объяснить очевидную роль GARP в организации плазматической мембраны, о которой ранее сообщалось при визуальных скринингах всего генома (Grossmann et al., 2008; Frohlich et al., 2009). Пока неясно, следуют ли сфинголипиды и стерины за объемным потоком мембранных материалов в эндоцитарном пути или предпочтительно рециркулируются ретромером и комплексами GARP. Несмотря на это, наши данные наиболее согласуются с гипотезой о том, что в отсутствие GARP сфинголипиды и стерины перенаправляются в вакуоли / лизосомы. В лизосомах сфинголипиды расщепляются кислой сфингомиелиназой и церамидазой, вероятно, способствуя увеличению сфингоидных оснований. Однако также возможно, что неправильная сортировка ферментов синтеза сфинголипидов или транспортных белков в мутантах GARP вносит вклад в наблюдаемые фенотипы.Например, белок, важный для экспорта промежуточных продуктов сфинголипидов из лизосом / вакуолей, может отсутствовать в мутантах GARP, тем самым увеличивая накопление вакуолярных сфинголипидов.
Некоторые из наших открытий предполагают, что накопление ранних промежуточных продуктов синтеза сфинголипидов из-за дефицита GARP может привести к клеточной токсичности. Мы показываем, что ингибирование SPT, которое снижает количество длинноцепочечных оснований у мутантов GARP, подавляет дефект роста этих штаммов. Напротив, ингибирование более поздних стадий синтеза сфинголипидов, например, путем блокирования церамид-синтазы или инозитолфосфорилцерамид-синтазы, не снижает уровни длинноцепочечных оснований и не увеличивает токсичность для мутантов GARP.Кроме того, обработка длинноцепочечным основанием PHS усугубляла эту токсичность. У дрожжей низкие уровни сфинголипидов плазматической мембраны активируют передачу сигналов TORC2 / Slm / Ypk для фосфорилирования Orm-белков, снимая их ингибирование SPT, увеличивая синтез сфинголипидов (Breslow et al., 2010; Han et al., 2010; Roelants et al. ., 2011; Berchtold et al., 2012). В соответствии с уменьшением сфинголипидов плазматической мембраны, мы обнаружили, что белки Orm1 / 2 гиперфосфорилируются у мутантов GARP, предполагая, что синтез сфинголипидов de novo также повышается.Это увеличение может усугубить липотоксичность, вызванную дефицитом GARP, из-за увеличения продукции этих ранних промежуточных продуктов синтеза.
Почему накопление длинноцепочечных оснований токсично, в настоящее время неясно. Одна возможность состоит в том, что длинноцепочечные основания обладают свойствами, подобными детергентам, особенно в кислой среде (Jimenez-Rojo et al., 2014), например, в дрожжевой вакуоли. В модельных мембранах, таких как гигантские однослойные везикулы, это действие, подобное детергенту, приводит к везикулярной утечке (Contreras et al., 2006). Это может объяснить обнаружение заметной фрагментации вакуолей и потенциальной утечки цинка из GARP-дефицитных дрожжевых вакуолей. В поддержку этой гипотезы мы обнаружили, что ингибирование SPT и уменьшение длинноцепочечных оснований подавляет чувствительность к цинку у мутантов GARP у дрожжей. Также согласуется с этой гипотезой, накопление промежуточных сфинголипидов нарушает ионный гомеостаз в лизосомах млекопитающих клеточной модели болезни Ниманна-Пика типа C (Lloyd-Evans et al., 2008).С другой стороны, известно, что длинноцепочечные основания ингибируют синтез глицеролипидов (Wu et al., 1993), что может способствовать их цитотоксичности.
Поскольку уровни сфинголипидов и стеролов согласованы в мембранах, неудивительно, что мы также обнаружили, что дефицит GARP изменяет метаболизм стеролов. Считается, что сфинголипиды и стерины взаимодействуют друг с другом через мембраны. Таким образом, дефицит GARP, вероятно, приводит к неправильной сортировке обоих в вакуоль / лизосому. Наши данные наиболее согласуются с моделью, в которой сфинголипиды разлагаются в лизосоме / вакуоли, что приводит к токсическому накоплению метаболитов сфинголипидов, тогда как стерины экспортируются и хранятся в липидных каплях цитоплазмы в виде более инертных сложных эфиров жирных кислот.В соответствии с этим снижение уровней сфинголипидов путем обработки мириоцином клеток дикого типа увеличивает стерины, окрашенные филиппином. Возможно, это указывает на то, что в отсутствие достаточного количества сфинголипидов стерины, которые не образуют комплексов со сфинголипидами, накапливаются и хранятся в форме сложного эфира. Неожиданным открытием стало то, что накопление стеринов в мутантах GARP подавляется за счет ингибирования синтеза сфинголипидов. Эти данные свидетельствуют о том, что помимо потери стерола у мутантов GARP, накопление промежуточных сфинголипидов нарушает нормальный гомеостаз стеролов, например, вмешиваясь в экспорт стерола из вакуоли / лизосомы или регуляцию синтеза.Это дополнительно подчеркивает, что основной причиной дефектов из-за дефицита GARP может быть лизосомная / вакуолярная дисфункция из-за накопления сфинголипидов.
В соответствии с нашими выводами о накоплении стеролов у мутантов GARP, предыдущие скрининги на фенотип липидных капель выявили мутации нескольких генов субъединиц GARP ( VPS51 , VPS53 и VPS54 ), которые связаны с накоплением нейтральных липидов в LDs ( Szymanski et al., 2007; Fei et al., 2008), предполагая, что дефицит GARP может модулировать метаболизм стеролов.Кроме того, мутации в гомологе Vps51 у рыбок данио, обезжиренном , приводят к увеличению количества липидных капель в печени и кишечнике (Liu et al., 2010).
Мутации в одном компоненте комплекса GARP, VPS53, вызывают PCCA2, тяжелое нейродегенеративное заболевание, характеризующееся глубокой умственной отсталостью, прогрессирующей микроцефалией, спастичностью и эпилепсией с ранним началом (Feinstein et al., 2014). Аутосомное заболевание, связанное до сих пор с двумя аллелями PCCA2, миссенс-мутацией Q695R и мутацией донора сплайсинга, встречается преимущественно у евреев марокканского происхождения.Наши данные показывают, что одна из этих мутаций, VPS53, Q695R, приводит к дефектам в дрожжах, которые подобны, хотя и не столь серьезны, как делеция Vps53. Кроме того, мы показываем, что промежуточные уровни сфинголипидов повышены в фибробластах пациентов с PCCA2, что можно исправить путем ингибирования биосинтеза сфинголипидов мириоцином. Таким образом, патогенез PCCA2 может быть, по крайней мере частично, обусловлен дефектами липидного баланса и хранения.
Интересно, что нарушение субъединицы GARP Vps54 у мышей приводит к фенотипу wobbler , что указывает на общие характеристики нейродегенеративного заболевания БАС, включая прогрессирующую двигательную дегенерацию и потерю двигательных нейронов (Perez-Victoria et al., 2010; Moser et al., 2013). Анализ липидных профилей мозга позволяет предположить, что промежуточные сфинголипиды и эфиры стерола накапливаются у пациентов с БАС (Cutler et al., 2002). Кроме того, мутации в механизме эндолизосомного транспорта вовлечены в нейродегенеративные расстройства, включая БАС и FTD (CHMP2B, FIG4, VAPB и VCP) (Yang et al., 2001; Parkinson et al., 2006; Johnson et al. , 2010; Maruyama et al., 2010), а дефекты ретроградного транспорта увеличивают риск болезни Паркинсона (VPS35) (Zimprich et al., 2011). Таким образом, наши данные предполагают, что липидный дисбаланс и токсичность из-за нарушения эндолизосомного переноса могут быть общей чертой этой группы нейродегенеративных заболеваний. Поскольку в наших исследованиях ингибирование SPT обратило вспять некоторые аспекты клеточной дисфункции, наши результаты предполагают, что ингибирование начальной стадии синтеза сфинголипидов может обеспечить полезную терапевтическую стратегию для применения при этих заболеваниях.
No related posts.

Комплекс это: Недопустимое название — Викисловарь

КОМПЛЕКС — это… Что такое КОМПЛЕКС?

Что такое жилые комплексы и как это должно выглядеть на самом деле? — блоги риэлторов

«Первый комплекс – это наш первый шаг» — Единый Портал органов государственной власти и местного самоуправления «Официальный Татарстан»

COMPLEX — Перевод на русский

это .

Зачем нужны мультивитамины? — Наука о красоте — Красота и здоровье — Beauty Edit

Что такое комплекс маркетинга: модели — Определение

Цель комплекса маркетинга

Элементы комплекса маркетинга 4P

Модели комплекса маркетинга

5P

7P

SIVA

Ресурсы:

Промышленный комплекс «Спаситель белых» — Атлантика

Подробнее об Армии сопротивления Господа

Комплекс SWI / SNF — механорегулируемый ингибитор YAP и TAZ

Эрнест Джонс | Британский психоаналитик

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Что сохраняется в файле cookie?

Комплекс Ccr4-Not является ключевым регулятором экспрессии эукариотических генов

Принадлежности

Принадлежности

Абстрактный

Цифры

использованная литература

Типы публикаций

Условия MeSH

LinkOut — дополнительные ресурсы

Полнотекстовые источники

Другие источники литературы

Исследовательские материалы

Комплекс Arp2 / 3 связывается и активируется двумя белками WASP.

Резюме

Результаты

Два разных сайта связывания WASP VCA на комплексе Arp2 / 3.

Идентификация сайтов связывания VCA на комплексе Arp2 / 3.

Отдельные функции для двух сайтов связывания VCA.

Обсуждение

Два сайта связывания VCA на комплексе Arp2 / 3.

A Модель для Arp2 / 3∶VCA

Последствия для активации комплекса Arp2 / 3.

Заключение

Материалы и методы

Приготовление белка.

Анализ сборки актина.

Аналитическое ультрацентрифугирование.

Сшивка и перенос метки.

Молекулярное моделирование

Благодарности

Сноски

Комплекс GARP необходим для гомеостаза клеточных сфинголипидов

Читайте также:

Плохая память в 30 лет: Проблемы с памятью: усталость, перегрузка или что-то более серьезное

Ностальгичный – ностальгичный — Викисловарь

Фертильность это что такое: Фертильность — что это такое и как повысить фертильность у женщины

Добавить комментарий Отменить ответ

Рубрики